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【摘要】目的:研究标本溶血对ELISA检验HBsAg结果的影响及防范措施.方法:通过临床对标本溶血的研究,了解溶血产生的原因、溶血对HBsAg检测的影响、溶血影响ELISA检测HBsAg的机理以及溶血标本的防范措施。结果:标本溶血对我们检验工作确实存在一定的影响。
【关键词】溶血ELISA;HBsAg
【中图分类号】R796【文献标识码】D【文章编号】1005-0515(2010)010-0028-01
HBsAg是各级医院的常规检查项目和健康体检项目,是诊断乙肝的主要指标.随着医疗技术的不断发展更新,ELISA因其方法简便、灵敏度高、特异性强、无污染等,而被各医疗机构广泛采用.溶血是临床检验中最常见的干扰影响因素,因为溶血标本中存在各种非特异性物质,使结果出现偏差,所以血液标本一般都要求空腹采集且不能溶血.如今临床疾病的诊断与治疗越来越依赖于检验数据的真实与准确性,因此有必要就标本溶血对ELISA检测HbsAg作进一步探讨。
1 临床研究与防范措施
1.1 标本溶血的原因。溶血的原因主要有体外溶血和体内溶血.体外溶血可由物理因素(如机械性破坏、冰冻)、化学因素(如血样接触表面活性剂)和代谢性因素(如遗传病引起的血细胞脆性增加)引起.体内溶血则可由物理因素(人工心脏瓣膜或大血管手术后)、生物因素(如恶性疟疾)和药物毒性反应等因素引起[1]。
在临床上常见的引起标本溶血的原因主要有[2]:由于病人严重脱水、低血容量休克等原因导致穿刺困难造成的溶血;由于抽血器具质量不合格如真空管负压不够或塑料试管质量较差导致的溶血;用干燥管采血为了尽快分离血清用竹签搅拌不当引起的溶血等。
1.2 溶血对HBsAg检测的影响。尽管各地医疗机构积极启动质控措施以减少标本检测前后造成的误差,但血液标本溶血还是不容忽视.据金建娟[3]等报道该院1年内共送检急诊生化标本532份,其中不合格标本81份,占15.2%;溶血标本21份,占不合格标本的25.93%。
1.3认为无影响的 据文献[4~5]的实验结果显示溶血标本和非溶血标本的阴性、阳性结果无显著性差异,但HBsAg阳性溶血标本OD值明显大于相应非溶血标本OD值.因此得出结论,标本溶血不影响HBsAg结果的判定,但是会使HBsAg阳性标本的OD值增加。
1.4认为有影响的 钱厚明[6]初检的17例溶血标本5例HBsAg阳性,复检后仍有2例阳性,3例阴性,作者认为是溶血导致了假阳性结果.当溶血造成25%的RBC破裂时可导致假阳性[7],溶血显著增加HBsAg的OD值,造成假阳性结果[8~9]。
1.5认为方法差异的 在龙宪和等[10]的数据表明,溶血的HBsAg阴性和阳性标本均可导致ELISA一步法假阳性结果的出现,而二步法检测结果呈现了一致性。
2 溶血影响ELISA检测HBsAg的机理
溶血致使红细胞破裂,Hb、细胞内液等物质释放入血清或血浆中[11],造成对血清的稀释.Hb具有类过氧化物酶活性,如果反应孔非特异吸附Hb而残留,则可催化底物显色,使A值升高造成假阳性,特别是对阴性血清的检验,即使轻微溶血也会造成假阳性.细胞内液的进入.在应用ELISA方法检测HBsAg时,反应孔包被物的浓度呈相对定值(抗原抗体反应存在最适比例和后带现象).溶血可使HBsAg高浓度的样品A值升高,HBsAg浓度与A值呈线性关系时才会因溶血的稀释作用使A值下降,HBsAg浓度近临界值时可造成假阴性。
3 溶血标本的防范措施
4.1 正确掌握穿刺方法 首先选择好穿刺部位,成人多选用肘中静脉或贵要静脉,婴幼儿多选用颈外静脉或股静脉,尽量一次性抽取,抽完血取下针头缓慢注入试管,抽血和向试管注血时不宜力度太大,以免产生大量气泡,引起溶血.扎血带的时间不能过长,不宜反复拍打穿刺部位,以防机械性溶血。
4.2 妥善处理标本 标本送入实验室后,应及时检测,对于当日不能检测的标本应按检测要求妥善存贮.避免血液未开始凝固或凝固不完全时就强行离心,因为此时分离的血清中仍残留部分纤维蛋白原,ELISA测定时,易造成假阳性结果.标本在离心时应缓慢加速和减速,以免发生溶血,对于已溶血的标本应不予使用.不可用存在安全隐患的试管,以免离心时试管突然破裂导致溶血和污染环境。
4.3掌控洗涤质量溶血标本ELISA一步法洗涤时,残留物往往难以完全洗脱,二步法经过二次洗涤可以大大降低残留物存在.单桂秋等[5]的实验未体现血中Hb非特异性吸附的影响.龙宪和等[10]采用二步法操作可以排除溶血释出的Hb对HBsAg检验的影响也说明洗板质量在ELISA检验中的重要性,所以应良好的掌控洗涤质量.引进先进的洗涤设备和学习科学的洗涤技巧,则可能大大减少或排除非特异性吸附的干扰。
5 结论
这就使我们认识到溶血标本采集与处理的重要性,要做到细心、细心、在细心,以免不必要的事情发生,防范于未然.
参考文献
[1] 李宇飞.溶血对乙型肝炎表面抗原检测结果的影响.长治医学院学报,2005,12(19):7
[2] 张小洁,刘建芝.真空采血标本溶血原因分析及预防措施.护士进修杂志,2001,16(3):180
[3] 金建娟,张玲.急诊血生化标本不符合要求的原因分析.解放军护理杂志,1999,16(5):47~48
[4] 许斌,朱虎定.ELISA检验HBsAg影响因素的探讨.临床检验杂志,2000,18(4):232
[5] 单桂秋,苏建婷.溶血及脂浊样品对ELISA检验HBsAg的影响.临床检验杂志,1999,17(2):102~103
[6] 钱厚明,赵江燕,张燕.应重视ELISA检验HBsAg灰区范围内样品的复检.上海医学检验杂志,2002,17(3):156
[7] 刘玉振,张淑琴,马宏伟.溶血对抗-HCV、HBsAg等测定结果的影响.中国输血杂志,1999,12(1):32~33
[8] 陈芙蓉.溶血对抗-HCV检测结果的影响.湖南医学高等专科学校学报,2003,3(3):23~24
[9] 方晔.标本久置及溶血对ELISA方法检测HBsAg的影响.江西医学检验,2003,21(5):405
[10] 龙宪和,童华诚.溶血对乙型肝炎五项血清标志物检验结果的影响.中华医学检验杂志,1996,19(1):47~48
[11] 丛玉隆,王淑娟.今日临床检验学.北京:中国科学技术出版社,1997,10
作者单位:331600 江西省吉安市吉水县人民医院
【关键词】溶血ELISA;HBsAg
【中图分类号】R796【文献标识码】D【文章编号】1005-0515(2010)010-0028-01
HBsAg是各级医院的常规检查项目和健康体检项目,是诊断乙肝的主要指标.随着医疗技术的不断发展更新,ELISA因其方法简便、灵敏度高、特异性强、无污染等,而被各医疗机构广泛采用.溶血是临床检验中最常见的干扰影响因素,因为溶血标本中存在各种非特异性物质,使结果出现偏差,所以血液标本一般都要求空腹采集且不能溶血.如今临床疾病的诊断与治疗越来越依赖于检验数据的真实与准确性,因此有必要就标本溶血对ELISA检测HbsAg作进一步探讨。
1 临床研究与防范措施
1.1 标本溶血的原因。溶血的原因主要有体外溶血和体内溶血.体外溶血可由物理因素(如机械性破坏、冰冻)、化学因素(如血样接触表面活性剂)和代谢性因素(如遗传病引起的血细胞脆性增加)引起.体内溶血则可由物理因素(人工心脏瓣膜或大血管手术后)、生物因素(如恶性疟疾)和药物毒性反应等因素引起[1]。
在临床上常见的引起标本溶血的原因主要有[2]:由于病人严重脱水、低血容量休克等原因导致穿刺困难造成的溶血;由于抽血器具质量不合格如真空管负压不够或塑料试管质量较差导致的溶血;用干燥管采血为了尽快分离血清用竹签搅拌不当引起的溶血等。
1.2 溶血对HBsAg检测的影响。尽管各地医疗机构积极启动质控措施以减少标本检测前后造成的误差,但血液标本溶血还是不容忽视.据金建娟[3]等报道该院1年内共送检急诊生化标本532份,其中不合格标本81份,占15.2%;溶血标本21份,占不合格标本的25.93%。
1.3认为无影响的 据文献[4~5]的实验结果显示溶血标本和非溶血标本的阴性、阳性结果无显著性差异,但HBsAg阳性溶血标本OD值明显大于相应非溶血标本OD值.因此得出结论,标本溶血不影响HBsAg结果的判定,但是会使HBsAg阳性标本的OD值增加。
1.4认为有影响的 钱厚明[6]初检的17例溶血标本5例HBsAg阳性,复检后仍有2例阳性,3例阴性,作者认为是溶血导致了假阳性结果.当溶血造成25%的RBC破裂时可导致假阳性[7],溶血显著增加HBsAg的OD值,造成假阳性结果[8~9]。
1.5认为方法差异的 在龙宪和等[10]的数据表明,溶血的HBsAg阴性和阳性标本均可导致ELISA一步法假阳性结果的出现,而二步法检测结果呈现了一致性。
2 溶血影响ELISA检测HBsAg的机理
溶血致使红细胞破裂,Hb、细胞内液等物质释放入血清或血浆中[11],造成对血清的稀释.Hb具有类过氧化物酶活性,如果反应孔非特异吸附Hb而残留,则可催化底物显色,使A值升高造成假阳性,特别是对阴性血清的检验,即使轻微溶血也会造成假阳性.细胞内液的进入.在应用ELISA方法检测HBsAg时,反应孔包被物的浓度呈相对定值(抗原抗体反应存在最适比例和后带现象).溶血可使HBsAg高浓度的样品A值升高,HBsAg浓度与A值呈线性关系时才会因溶血的稀释作用使A值下降,HBsAg浓度近临界值时可造成假阴性。
3 溶血标本的防范措施
4.1 正确掌握穿刺方法 首先选择好穿刺部位,成人多选用肘中静脉或贵要静脉,婴幼儿多选用颈外静脉或股静脉,尽量一次性抽取,抽完血取下针头缓慢注入试管,抽血和向试管注血时不宜力度太大,以免产生大量气泡,引起溶血.扎血带的时间不能过长,不宜反复拍打穿刺部位,以防机械性溶血。
4.2 妥善处理标本 标本送入实验室后,应及时检测,对于当日不能检测的标本应按检测要求妥善存贮.避免血液未开始凝固或凝固不完全时就强行离心,因为此时分离的血清中仍残留部分纤维蛋白原,ELISA测定时,易造成假阳性结果.标本在离心时应缓慢加速和减速,以免发生溶血,对于已溶血的标本应不予使用.不可用存在安全隐患的试管,以免离心时试管突然破裂导致溶血和污染环境。
4.3掌控洗涤质量溶血标本ELISA一步法洗涤时,残留物往往难以完全洗脱,二步法经过二次洗涤可以大大降低残留物存在.单桂秋等[5]的实验未体现血中Hb非特异性吸附的影响.龙宪和等[10]采用二步法操作可以排除溶血释出的Hb对HBsAg检验的影响也说明洗板质量在ELISA检验中的重要性,所以应良好的掌控洗涤质量.引进先进的洗涤设备和学习科学的洗涤技巧,则可能大大减少或排除非特异性吸附的干扰。
5 结论
这就使我们认识到溶血标本采集与处理的重要性,要做到细心、细心、在细心,以免不必要的事情发生,防范于未然.
参考文献
[1] 李宇飞.溶血对乙型肝炎表面抗原检测结果的影响.长治医学院学报,2005,12(19):7
[2] 张小洁,刘建芝.真空采血标本溶血原因分析及预防措施.护士进修杂志,2001,16(3):180
[3] 金建娟,张玲.急诊血生化标本不符合要求的原因分析.解放军护理杂志,1999,16(5):47~48
[4] 许斌,朱虎定.ELISA检验HBsAg影响因素的探讨.临床检验杂志,2000,18(4):232
[5] 单桂秋,苏建婷.溶血及脂浊样品对ELISA检验HBsAg的影响.临床检验杂志,1999,17(2):102~103
[6] 钱厚明,赵江燕,张燕.应重视ELISA检验HBsAg灰区范围内样品的复检.上海医学检验杂志,2002,17(3):156
[7] 刘玉振,张淑琴,马宏伟.溶血对抗-HCV、HBsAg等测定结果的影响.中国输血杂志,1999,12(1):32~33
[8] 陈芙蓉.溶血对抗-HCV检测结果的影响.湖南医学高等专科学校学报,2003,3(3):23~24
[9] 方晔.标本久置及溶血对ELISA方法检测HBsAg的影响.江西医学检验,2003,21(5):405
[10] 龙宪和,童华诚.溶血对乙型肝炎五项血清标志物检验结果的影响.中华医学检验杂志,1996,19(1):47~48
[11] 丛玉隆,王淑娟.今日临床检验学.北京:中国科学技术出版社,1997,10
作者单位:331600 江西省吉安市吉水县人民医院