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[摘要] 目的 探讨平脉通颗粒对D-半乳糖所致亚急性衰老模型自由基代谢的影响。方法 Wistar大鼠60只,随机分为模型对照组、平脉通组。选用昆明种小鼠60只,随机分为模型对照组、平脉通组。实验结束后将大鼠处死,断头取脑,制成10%的组织匀浆,测定一氧化氮(NO)、脂褐素(LP)、丙二醛含量(MDA)及超氧化物歧化酶活力(SOD);收集小鼠血液测定SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、MDA含量。结果 平脉通组与模型对照组比较,均有显著性差异(P<0.05,P<0.01),平脉通组中大鼠脑组织中NO含量显著增加,LP和MDA显著减少(P<0.01),小鼠血清中SOD、GSH-Px的含量(P<0.05,P<0.01)明显提高。结论 平脉通颗粒使D-半乳糖所致亚急性衰老模型NO含量增加,调整自由基代谢,提高抗氧化酶的活力,抑制自由基对机体的损伤,改善机体衰老导致的各种病理变化。
[关键词] 平脉通颗粒; D-半乳糖; 衰老模型; 自由基; 大鼠; 小鼠
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2009)27-19-02
Effects of Pingmaitong Granules on Free Radical Metabolism of D-galactose-induced Subacute Aging Model
PAN Guanghui CHEN Guohua MENG Xiangfeng SHEN Shouxiang
Weifang People’s Hospital,Shandong Provice,Weifang 261041,China
[Abstract] ObjectiveTo investigate the effects of Pingmaitong granules on free radical metabolism of D-galactose-induced subacute aging model. MethodsSixty Wistar rats were randomly divided into model control group and pingmaitong granule group,and 60 Kunming species mice were also randomly divided into model control group and Pingmaitong granule group. After the experiment was finished,Wistar rats were killed,and the brains were taken out to be prepared into 10% tissue homogenate for measuring the levels of NO,LP,MDA and SOD,and the blood from Kunming species mice was collected for measuring the levels of SOD,GSH-Px and MDA. ResultsPingmaitong granule group was significantly different from model control group(P<0.05,P<0.01). In pingmaitong granule group,the NO content of the Wistar rat brain was obviously increased,the levels of LP and MDA were decreased markedly(P<0.01), and the levels of serum SOD and GSH-Px of Kunming species mice were obviously increased(P<0.05,P<0.01). ConclusionPingmaitong granules can increase the NO content of D-galactose-induced subacute aging model,adjustfree radical metabolism,raise the antioxidase activity,inhibit free radical damage to the body,and improve a variety of pathological changes caused by the body aging.
[Key words]Pingmaitong granules; D-galactose; Aging model; Free radical; Rat; Mouse
根据老年人的生理、病理与临床特点,我们认为肾虚与血瘀并存是引起老化的重要原因之一,因而确定以补肾益气活血法为主组成平脉通,应用该方剂,参照《中药新药临床研究指导原则》[1]及第二次全国中医、中西医结合老年医学研究协作组会议通过的《延缓衰老中药的筛选规程和临床观察规范》[2],对衰老的动物模型进行了一系列的观察研究,报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 Wistar大鼠,体重选用200~260g,60只雌雄各半。昆明种小鼠,3月龄,体重20~25g,60只雌雄各半。
1.1.2 实验试剂 NO测试盒、SOD测试盒、GSH-Px、MDA试剂盒、脂褐素测定试剂盒等均由南京建成生物工程研究所提供。
1.2 药品制备
平脉通颗粒12g/袋(含生药量为24g),方剂组成:何首乌、肉苁蓉、炙黄芪、川芎、当归、丹参。由潍坊市中药厂加工,批号12980,做一般实验时临时配制成0.10g/mL、0.30g/mL 浓度的混悬液(含生药量分别为0.2g、0.6g),置4℃冰箱保存。
1.3 造模方法
參照《实验动物和动物实验技术》及中国人民解放军总医院老年医学研究所李文彬教授等人的方法进行。各组大鼠颈背部皮下注射20%D-半乳糖生理盐水0.5mL/d,连续42d;各组小鼠颈背部皮下注射20%D-半乳糖生理盐水0.5mL/d,连续30d,可造成亚急性衰老模型,出现神经功能、免疫功能及机体抗氧化作用降低。
1.4 动物分组及给药方法
选用Wistar大鼠60只,雄雌各半,分笼饲养随机分为两组,每组30只。(1)模型对照组:灌胃生理盐水5mL/d;(2)平脉通组:灌胃平脉通颗粒剂混悬液5mL/d(32.4 g/kg)。均分两次灌胃,连续12周。
选用昆明种小鼠60只,雄雌各半,分笼饲养随机分为两组,每组30只,(1)模型对照组:灌胃生理盐水5mL/d;(2)平脉通组:灌胃平脉通颗粒剂混悬液5mL/d(32.4 g/kg)。均分两次灌胃,连续12周。
1.5 统计学处理
分类资料采用构成比检验,等级资料采用Ridit分析,两样本均数比较采用t检验。
2 结果
将实验鼠处死,断头取脑,用生理盐水洗净血液及其他污物,滤纸吸干。取右半脑海马区脑组织(小鼠取全脑),电子天平称重,加10倍体积pH7.4磷酸盐缓冲液制备10%的组织匀浆,按试剂盒说明书操作,测定NO、LP、MDA、GSH-Px含量,用光化学扩增法测定SOD活力。用t检验法统计,结果见表1～3。
3 讨论
现代医学认为,衰老的机制之一是由于自由基体内反应水平增高时,作用于机体细胞的生物大分子,使分子受害,从而引起疾病和衰老。人体内有许多捕捉自由基的酶,如SOD等。人在中老年以后,此酶随着年龄的增长而减少[3]。近来的研究还发现,NO含量与衰老之间有相关关系,在衰老过程中发挥一定作用。因此在各种衰老理论中,衰老的自由基理论可能是最重要的一个。衰老的自由基理论认为,衰老和与衰老关联的退化性疾病基本上可归因于自由基对细胞成分和连接组织的有害进攻[4,5]。给实验动物连续注射D-半乳糖,因糖代谢紊乱发生衰老时的退行性变化,具有与自然衰老相类似的自由基代谢紊乱及抗氧化功能降低的特征。
中医学认为肾虚精亏、气虚血瘀是衰老的主要病因病机,延缓衰老在用补肾法的同时,同样强调补气养血活血。平脉通中以何首乌为主补肾固精;黄芪补气健脾;肉苁蓉补肾气,益精血;当归补血活血;川芎活血行气;丹参活血祛瘀通经。诸药合用,平补阴阳,调养五脏,温而不燥,补而不腻,性味平和,无阴阳偏盛之弊,全方共奏补肾填精养血活血之功效。
本实验结果表明,D-半乳糖致衰老模型大鼠和(或)小鼠血清和(或)腦组织SOD、GSH-Px、NO水平明显下降,LP、MDA水平明显升高,反映了衰老的病理特征。结果显示平脉通颗粒通过补肾益气活血可显著提高D-半乳糖致衰老模型大鼠和(或)小鼠血清和(或)脑组织SOD、GSH-Px、NO水平,显著降低LP、MDA。充分表明平脉通能增强机体抗氧化能力,具有提高机体清除自由基、减少自由基过氧化损伤的作用,显著降低随增龄而活性增高的LP、MDA,产生延缓组织器官老化的作用,为今后进行临床试验提供了参考依据。
[参考文献]
[1] 郑筱萸. 中药新药临床研究指导原则[M]. 北京:中国科学技术出版社,2002:361-390.
[2] 中国中西医学会老年医学研究会. 延缓衰老中药的筛选规程和临床观察规范[S]. 中西医结合杂志,1986,6(11):683.
[3] Egashira K,Inou T,Hirooka Y,et al. Effects of age on endothelium-dependent vasodilation of resistance coronary artery by acetylcholine in humans[J]. Circulation,1993,88:77-81.
[4] Harman D. Free radicals in aging[J]. Mol Cell Biochem,1988,84(2):155-161.
[5] Biesalski HK. Free radicals theory of aging[J]. Curr Opin Clin Nutr Metab Care,2002,5(1):5-10.
(收稿日期:2009-06-24)
[关键词] 平脉通颗粒; D-半乳糖; 衰老模型; 自由基; 大鼠; 小鼠
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2009)27-19-02
Effects of Pingmaitong Granules on Free Radical Metabolism of D-galactose-induced Subacute Aging Model
PAN Guanghui CHEN Guohua MENG Xiangfeng SHEN Shouxiang
Weifang People’s Hospital,Shandong Provice,Weifang 261041,China
[Abstract] ObjectiveTo investigate the effects of Pingmaitong granules on free radical metabolism of D-galactose-induced subacute aging model. MethodsSixty Wistar rats were randomly divided into model control group and pingmaitong granule group,and 60 Kunming species mice were also randomly divided into model control group and Pingmaitong granule group. After the experiment was finished,Wistar rats were killed,and the brains were taken out to be prepared into 10% tissue homogenate for measuring the levels of NO,LP,MDA and SOD,and the blood from Kunming species mice was collected for measuring the levels of SOD,GSH-Px and MDA. ResultsPingmaitong granule group was significantly different from model control group(P<0.05,P<0.01). In pingmaitong granule group,the NO content of the Wistar rat brain was obviously increased,the levels of LP and MDA were decreased markedly(P<0.01), and the levels of serum SOD and GSH-Px of Kunming species mice were obviously increased(P<0.05,P<0.01). ConclusionPingmaitong granules can increase the NO content of D-galactose-induced subacute aging model,adjustfree radical metabolism,raise the antioxidase activity,inhibit free radical damage to the body,and improve a variety of pathological changes caused by the body aging.
[Key words]Pingmaitong granules; D-galactose; Aging model; Free radical; Rat; Mouse
根据老年人的生理、病理与临床特点,我们认为肾虚与血瘀并存是引起老化的重要原因之一,因而确定以补肾益气活血法为主组成平脉通,应用该方剂,参照《中药新药临床研究指导原则》[1]及第二次全国中医、中西医结合老年医学研究协作组会议通过的《延缓衰老中药的筛选规程和临床观察规范》[2],对衰老的动物模型进行了一系列的观察研究,报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 Wistar大鼠,体重选用200~260g,60只雌雄各半。昆明种小鼠,3月龄,体重20~25g,60只雌雄各半。
1.1.2 实验试剂 NO测试盒、SOD测试盒、GSH-Px、MDA试剂盒、脂褐素测定试剂盒等均由南京建成生物工程研究所提供。
1.2 药品制备
平脉通颗粒12g/袋(含生药量为24g),方剂组成:何首乌、肉苁蓉、炙黄芪、川芎、当归、丹参。由潍坊市中药厂加工,批号12980,做一般实验时临时配制成0.10g/mL、0.30g/mL 浓度的混悬液(含生药量分别为0.2g、0.6g),置4℃冰箱保存。
1.3 造模方法
參照《实验动物和动物实验技术》及中国人民解放军总医院老年医学研究所李文彬教授等人的方法进行。各组大鼠颈背部皮下注射20%D-半乳糖生理盐水0.5mL/d,连续42d;各组小鼠颈背部皮下注射20%D-半乳糖生理盐水0.5mL/d,连续30d,可造成亚急性衰老模型,出现神经功能、免疫功能及机体抗氧化作用降低。
1.4 动物分组及给药方法
选用Wistar大鼠60只,雄雌各半,分笼饲养随机分为两组,每组30只。(1)模型对照组:灌胃生理盐水5mL/d;(2)平脉通组:灌胃平脉通颗粒剂混悬液5mL/d(32.4 g/kg)。均分两次灌胃,连续12周。
选用昆明种小鼠60只,雄雌各半,分笼饲养随机分为两组,每组30只,(1)模型对照组:灌胃生理盐水5mL/d;(2)平脉通组:灌胃平脉通颗粒剂混悬液5mL/d(32.4 g/kg)。均分两次灌胃,连续12周。
1.5 统计学处理
分类资料采用构成比检验,等级资料采用Ridit分析,两样本均数比较采用t检验。
2 结果
将实验鼠处死,断头取脑,用生理盐水洗净血液及其他污物,滤纸吸干。取右半脑海马区脑组织(小鼠取全脑),电子天平称重,加10倍体积pH7.4磷酸盐缓冲液制备10%的组织匀浆,按试剂盒说明书操作,测定NO、LP、MDA、GSH-Px含量,用光化学扩增法测定SOD活力。用t检验法统计,结果见表1～3。
3 讨论
现代医学认为,衰老的机制之一是由于自由基体内反应水平增高时,作用于机体细胞的生物大分子,使分子受害,从而引起疾病和衰老。人体内有许多捕捉自由基的酶,如SOD等。人在中老年以后,此酶随着年龄的增长而减少[3]。近来的研究还发现,NO含量与衰老之间有相关关系,在衰老过程中发挥一定作用。因此在各种衰老理论中,衰老的自由基理论可能是最重要的一个。衰老的自由基理论认为,衰老和与衰老关联的退化性疾病基本上可归因于自由基对细胞成分和连接组织的有害进攻[4,5]。给实验动物连续注射D-半乳糖,因糖代谢紊乱发生衰老时的退行性变化,具有与自然衰老相类似的自由基代谢紊乱及抗氧化功能降低的特征。
中医学认为肾虚精亏、气虚血瘀是衰老的主要病因病机,延缓衰老在用补肾法的同时,同样强调补气养血活血。平脉通中以何首乌为主补肾固精;黄芪补气健脾;肉苁蓉补肾气,益精血;当归补血活血;川芎活血行气;丹参活血祛瘀通经。诸药合用,平补阴阳,调养五脏,温而不燥,补而不腻,性味平和,无阴阳偏盛之弊,全方共奏补肾填精养血活血之功效。
本实验结果表明,D-半乳糖致衰老模型大鼠和(或)小鼠血清和(或)腦组织SOD、GSH-Px、NO水平明显下降,LP、MDA水平明显升高,反映了衰老的病理特征。结果显示平脉通颗粒通过补肾益气活血可显著提高D-半乳糖致衰老模型大鼠和(或)小鼠血清和(或)脑组织SOD、GSH-Px、NO水平,显著降低LP、MDA。充分表明平脉通能增强机体抗氧化能力,具有提高机体清除自由基、减少自由基过氧化损伤的作用,显著降低随增龄而活性增高的LP、MDA,产生延缓组织器官老化的作用,为今后进行临床试验提供了参考依据。
[参考文献]
[1] 郑筱萸. 中药新药临床研究指导原则[M]. 北京:中国科学技术出版社,2002:361-390.
[2] 中国中西医学会老年医学研究会. 延缓衰老中药的筛选规程和临床观察规范[S]. 中西医结合杂志,1986,6(11):683.
[3] Egashira K,Inou T,Hirooka Y,et al. Effects of age on endothelium-dependent vasodilation of resistance coronary artery by acetylcholine in humans[J]. Circulation,1993,88:77-81.
[4] Harman D. Free radicals in aging[J]. Mol Cell Biochem,1988,84(2):155-161.
[5] Biesalski HK. Free radicals theory of aging[J]. Curr Opin Clin Nutr Metab Care,2002,5(1):5-10.
(收稿日期:2009-06-24)