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摘要：反向间接血凝试验（RIHA）是动物疾病诊断中最常用的实验室检测技术，在动物的田间及人类的诊断临床检测中得到广泛的运用。现笔者为探讨反向间接血凝试验在动物疾病诊断中的运用，以期为兽医临床科技工作者更加合理科学的诊断动物疾病提供有价值的参考。
关键词：反向间接血凝试验；诊断；应用
反向间接血凝试验（reverse indirecthemagglutination test，RIHA）是将可溶性抗原（或抗体）先吸附于红细胞表面，使其成为致敏载体颗粒，然后和其相应抗体（或抗原）作 用，在有电解质存在的适宜条件下，出现的 凝集现象，称为间接血凝集试验。将可溶性 抗原吸附于红细胞表面（致敏），用以检测 未知抗体的方法称为正向间接血凝试验；将已知特异性抗体吸附于红细胞表面（致敏），用以检测样品中的相应抗原的方法称为反向间接血凝试验。RIHA 实验室检测技术具有结果准确、操作简便及快速便捷的特点，试验过程无需特殊仪器及试剂，具有极强的现场适应性，因此在人类和动物疾病的田间和临床检测均得到广泛的推广运用。本文综述了 RIHA 在动物疾病诊断中的应用进展，以期为兽医临床中致力于疾病诊断的科研工作者提供参考。
1动物病毒病
1.1 猪病
RIHA 为我国鉴定口蹄疫病毒（FMDV）的行业标准，可对FMDV 进行快速准确的初步鉴定。汪德友[1]等在研究中运用McAbDot-ELISA检测法（免疫吸附试验与单克隆抗体斑点酶）及 单独RIHA方法对生猪的FMDV 和SVDV两个指标进行了检测，其检测结果显示McAb Dot-ELISA具有更加显著的特异性，且操作简便，与RIHA相比更具有敏感性、稳定性及直观性。RIHA 在检测的过程中虽然具有较高的灵敏度，但其对个别被检抗原进行检测时可能会出现非特异性凝集现象，影响最终的检测结果。将猪瘟病毒（CSFV）中的免疫血清且提取 IgG 进行纯化后，运用其致敏绵羊红细胞进行RIHA ，可检测生猪扁桃体、脾脏及淋巴结等病原中的CSFV 抗原，其存在的不足之处为处理组织病料的方法存在一定的差异性，这种差异性对血细胞带来一定的干扰，进而引发非特异性凝集现象，对其结果准确性造成严重的影响降低。陈艳衡[2]等在其研究实验中，采集了87份汉普夏、大约、长白及杜洛克等品种的猪血清样品检测研究测试，运用RIHA 试验等猪源乙型肝炎病毒抗原（HBsAg）进行检测及评定，结显示共计检出3例（3.4%）阳性，表明其具有较为理想的特异性及敏感性。张春杰[3]等在研究中为探讨RIHA 试验评定猪伪狂犬病毒（PRV）中的价值，运用绵羊红细胞（单抗致敏）建立了RIHA检测，结果显示，血清中与试验（SN）的相符率达96.4%，由此認为 RIHA在PRV常规诊断中具有较高的运用价值。
1.2羊病
国内外动物疾病检测研究人员为实现羊病的快速检测及评定，建立了山羊痘病毒（GPV）的RIHA方法，该方法可确诊的检测组织标本中的GPV，同时对感染细胞培养中的GPV的检测也具有较为显著的特异性。致敏绵羊红细胞对于山羊痘病毒的诊断具有较高的准确性，目前动物实验中对于绵羊红细胞致敏的检测方法很多，在实际检测工作中可根据实际情况徐选择合适的检测方法。庄金秋，梅建国[4]等 研究中开展绵羊红细胞致敏检测时，使用的是戊二醛和单宁酸进行检测。结果显示，这种致敏试验方法可显著提升绵羊痘的诊断效果及有效性。
1.3禽病
史国忠[5]等在其研究中为检测鸡传染性支气管炎病毒（IBV），建立了 RIHA 检测法。结果显示：实验聚乙二醇（PEG）对病料进行浓缩后，IBV 的检出率显著提升，而高免血清致敏红细胞的纯度越高其IBV 敏感度越低，两者间为负相关关系。研究中将65 份鸡血清样品作为研究对象，分别使用RPHI 及AGP 两种方法进行检测，结果显示：AGP共计检出阳性21份，其阳性检出率为23.3% ；RPHI共计检出阳性61份，其阳性检出率达93.8%。运用RPHI对AGP方法检出的21份阳性血清进行再次检测，其结果均显示阳性 ；而RPHI 检测AGP 检测中的44份阴性血清，结果显示RPHI共计检出38份阳性，因此可见RPHI 检测方法相对AGP来讲，检测准确性更高，且检出率也更加高。等在研究中为探讨RIHA 法对鸭瘟病毒（Virus）检测的价值，结果显示，进行3小时的检测即可判读其结果，具有操作简便且检测时间短且设备试剂费用不高、致敏细胞保存时间长，缺点在于其敏感性不高，仅仅适合进行少量的 DPV 检测。相对DPV 定性检测的价值来讲，病鸭出现大面积感染且送检组织内存在数量较大的病毒时，使用RIHA方法进行检测其可表现出较为突出的敏感性，具有较显著的实用价值。
1.4犬病
动物研究学者使用RIHA对犬血清进行检测，结果显示，共计检出乙肝表面抗原（HBsAg）12例阳性，其阳性率为15.78%（12/76），同时运用酶联免疫吸附试验（ELISA）对其进行复检，结果显示，两种检验方法取得阳性符合率大93%，其阴性符合率则达到 100%。
2小结
RIHA试验是动物及人类最常用的田间及临床检测方法之一。在动物的疾病检测中，该检验最常用检测红细胞是羊、兔、鸡及O-凝血人红细胞。新鲜的红细胞对吸附多糖抗原具有显著的效果，致敏的新鲜红细胞还具有保存时间短、易碎、溶血且极易受到污染等特点，通常情况下仅仅可使用2至3天。因此，红细胞增敏通常是在致敏之前进行的。醛类化合物在吸附蛋白抗原及抗体方面表现出较明显的能力，可长期保存，不发生溶血。RIHA不需复杂的设备，且操作简单方便，进行检测时只需在V型96井微反应板上进行，且检测时间短，结果很容易判断，检测的特异性及重现性较为突出，可在3小时内确诊，因此临床及田间使用价值高。RIHA具有特异性高、灵敏度高、操作简便等优点，适用于少量标本的临床诊断和检测，可用于动物疾病诊断、生物制品开发和基础水产养殖。具有广阔的应用前景。
参考文献
[1]汪德友.畜牧兽医动物防疫工作重点与存在的主要问题[J].农民致富之友，2018（16）：234.
[2]陈艳衡.中小养殖场动物疾病预防与控制方法探究[J].畜禽业，2018（08）：144-145.
[3]张春杰.浅议兽医病理诊断技术在动物疾病诊治中的作用[J].黑龙江科技信息，2016（28）：269.
[4]庄金秋，梅建国，王玉茂，谢金文，莫玲，沈志强.反向间接血凝试验在畜禽病毒疾病诊断中的应用进展[J].中国动物保健，2016，18（06）：72-73.
[5]史国忠.兽医病理学在动物疾病诊断及生产中的应用[J].中国畜牧兽医文摘，2015，31（11）：163.
关键词：反向间接血凝试验；诊断；应用
反向间接血凝试验（reverse indirecthemagglutination test，RIHA）是将可溶性抗原（或抗体）先吸附于红细胞表面，使其成为致敏载体颗粒，然后和其相应抗体（或抗原）作 用，在有电解质存在的适宜条件下，出现的 凝集现象，称为间接血凝集试验。将可溶性 抗原吸附于红细胞表面（致敏），用以检测 未知抗体的方法称为正向间接血凝试验；将已知特异性抗体吸附于红细胞表面（致敏），用以检测样品中的相应抗原的方法称为反向间接血凝试验。RIHA 实验室检测技术具有结果准确、操作简便及快速便捷的特点，试验过程无需特殊仪器及试剂，具有极强的现场适应性，因此在人类和动物疾病的田间和临床检测均得到广泛的推广运用。本文综述了 RIHA 在动物疾病诊断中的应用进展，以期为兽医临床中致力于疾病诊断的科研工作者提供参考。
1动物病毒病
1.1 猪病
RIHA 为我国鉴定口蹄疫病毒（FMDV）的行业标准，可对FMDV 进行快速准确的初步鉴定。汪德友[1]等在研究中运用McAbDot-ELISA检测法（免疫吸附试验与单克隆抗体斑点酶）及 单独RIHA方法对生猪的FMDV 和SVDV两个指标进行了检测，其检测结果显示McAb Dot-ELISA具有更加显著的特异性，且操作简便，与RIHA相比更具有敏感性、稳定性及直观性。RIHA 在检测的过程中虽然具有较高的灵敏度，但其对个别被检抗原进行检测时可能会出现非特异性凝集现象，影响最终的检测结果。将猪瘟病毒（CSFV）中的免疫血清且提取 IgG 进行纯化后，运用其致敏绵羊红细胞进行RIHA ，可检测生猪扁桃体、脾脏及淋巴结等病原中的CSFV 抗原，其存在的不足之处为处理组织病料的方法存在一定的差异性，这种差异性对血细胞带来一定的干扰，进而引发非特异性凝集现象，对其结果准确性造成严重的影响降低。陈艳衡[2]等在其研究实验中，采集了87份汉普夏、大约、长白及杜洛克等品种的猪血清样品检测研究测试，运用RIHA 试验等猪源乙型肝炎病毒抗原（HBsAg）进行检测及评定，结显示共计检出3例（3.4%）阳性，表明其具有较为理想的特异性及敏感性。张春杰[3]等在研究中为探讨RIHA 试验评定猪伪狂犬病毒（PRV）中的价值，运用绵羊红细胞（单抗致敏）建立了RIHA检测，结果显示，血清中与试验（SN）的相符率达96.4%，由此認为 RIHA在PRV常规诊断中具有较高的运用价值。
1.2羊病
国内外动物疾病检测研究人员为实现羊病的快速检测及评定，建立了山羊痘病毒（GPV）的RIHA方法，该方法可确诊的检测组织标本中的GPV，同时对感染细胞培养中的GPV的检测也具有较为显著的特异性。致敏绵羊红细胞对于山羊痘病毒的诊断具有较高的准确性，目前动物实验中对于绵羊红细胞致敏的检测方法很多，在实际检测工作中可根据实际情况徐选择合适的检测方法。庄金秋，梅建国[4]等 研究中开展绵羊红细胞致敏检测时，使用的是戊二醛和单宁酸进行检测。结果显示，这种致敏试验方法可显著提升绵羊痘的诊断效果及有效性。
1.3禽病
史国忠[5]等在其研究中为检测鸡传染性支气管炎病毒（IBV），建立了 RIHA 检测法。结果显示：实验聚乙二醇（PEG）对病料进行浓缩后，IBV 的检出率显著提升，而高免血清致敏红细胞的纯度越高其IBV 敏感度越低，两者间为负相关关系。研究中将65 份鸡血清样品作为研究对象，分别使用RPHI 及AGP 两种方法进行检测，结果显示：AGP共计检出阳性21份，其阳性检出率为23.3% ；RPHI共计检出阳性61份，其阳性检出率达93.8%。运用RPHI对AGP方法检出的21份阳性血清进行再次检测，其结果均显示阳性 ；而RPHI 检测AGP 检测中的44份阴性血清，结果显示RPHI共计检出38份阳性，因此可见RPHI 检测方法相对AGP来讲，检测准确性更高，且检出率也更加高。等在研究中为探讨RIHA 法对鸭瘟病毒（Virus）检测的价值，结果显示，进行3小时的检测即可判读其结果，具有操作简便且检测时间短且设备试剂费用不高、致敏细胞保存时间长，缺点在于其敏感性不高，仅仅适合进行少量的 DPV 检测。相对DPV 定性检测的价值来讲，病鸭出现大面积感染且送检组织内存在数量较大的病毒时，使用RIHA方法进行检测其可表现出较为突出的敏感性，具有较显著的实用价值。
1.4犬病
动物研究学者使用RIHA对犬血清进行检测，结果显示，共计检出乙肝表面抗原（HBsAg）12例阳性，其阳性率为15.78%（12/76），同时运用酶联免疫吸附试验（ELISA）对其进行复检，结果显示，两种检验方法取得阳性符合率大93%，其阴性符合率则达到 100%。
2小结
RIHA试验是动物及人类最常用的田间及临床检测方法之一。在动物的疾病检测中，该检验最常用检测红细胞是羊、兔、鸡及O-凝血人红细胞。新鲜的红细胞对吸附多糖抗原具有显著的效果，致敏的新鲜红细胞还具有保存时间短、易碎、溶血且极易受到污染等特点，通常情况下仅仅可使用2至3天。因此，红细胞增敏通常是在致敏之前进行的。醛类化合物在吸附蛋白抗原及抗体方面表现出较明显的能力，可长期保存，不发生溶血。RIHA不需复杂的设备，且操作简单方便，进行检测时只需在V型96井微反应板上进行，且检测时间短，结果很容易判断，检测的特异性及重现性较为突出，可在3小时内确诊，因此临床及田间使用价值高。RIHA具有特异性高、灵敏度高、操作简便等优点，适用于少量标本的临床诊断和检测，可用于动物疾病诊断、生物制品开发和基础水产养殖。具有广阔的应用前景。
参考文献
[1]汪德友.畜牧兽医动物防疫工作重点与存在的主要问题[J].农民致富之友，2018（16）：234.
[2]陈艳衡.中小养殖场动物疾病预防与控制方法探究[J].畜禽业，2018（08）：144-145.
[3]张春杰.浅议兽医病理诊断技术在动物疾病诊治中的作用[J].黑龙江科技信息，2016（28）：269.
[4]庄金秋，梅建国，王玉茂，谢金文，莫玲，沈志强.反向间接血凝试验在畜禽病毒疾病诊断中的应用进展[J].中国动物保健，2016，18（06）：72-73.
[5]史国忠.兽医病理学在动物疾病诊断及生产中的应用[J].中国畜牧兽医文摘，2015，31（11）：163.