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【摘要】采用腹腔注射氧嗪酸钾盐的方法复制不同水平高尿酸血症大鼠动物模型，Western blot检测大鼠海马区APP的表达。结果示高尿酸血症大鼠海马区APP表达较正常对照组明显上调，并随着血清尿酸水平的上升而升高。因此，血清尿酸过高，可能促进AD的发生或发展。
【关键词】高尿酸血症 淀粉样肽前体蛋白
【中图分类号】R-1【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2014）08-0307-01
高尿酸血症（Hyperuricemia,HUA）是一种由体内嘌呤代谢紊乱引起的疾病，主要临床表现为血清尿酸水平的升高。尿酸（Uric Acid，UA）具有抗氧化和促氧化双重性质，在多种中枢神经系统疾病中起重要作用，但尿酸与阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）之间的关系仍存在争议。
1材料与方法
1.1实验动物
山东大学实验动物中心提供的清洁级Wistar健康雄性大鼠共48只，体重（200±10）g，自由饮水与饮食。
1.2 高尿酸血症动物模型的建立
将大鼠随机分组，即正常对照组(A)、低剂量组(B)、中剂量组(C)及高剂量组(D)，每组12只大鼠。OAPS采用灭菌蒸馏水配成300、600、900 mg/kg3种剂量，利用腹腔注射氧嗪酸钾的方法，给药体积为1 ml/(100g•d)，正常对照组同时注射等体积生理盐水。
1.3血清尿酸水平测定
分别于实验第0、28、56天采用断尾取血法采集血液约1 ml，经室温自然凝血、离心，取上清液200 μl于EP管中，检测血清尿酸水平。
1.4 大鼠海马区APP的检测
于实验56天后，各组大鼠按1 ml/100g体重腹腔注射4 %水合氯醛，麻醉后剥取大鼠海马区脑组织，立即置于－80 ℃保存。测定蛋白浓度，经SDS-PAGE电泳、转印蛋白质，进行化学发光检测，使用Gel-Pro Analyzer软件分析处理，检测海马区APP的表达。
1.5统计学分析
数据采用SPSS13.0统计软件处理，结果采用均数±标准差表示，以P＜0.05为具有统计学意义。
2 结果
2.1各组动物血清尿酸水平的测定
实验第0天，各组动物血清尿酸水平比较无明显差异性。于实验第28天末检测血清尿酸水平与对照组比较，各组动物血清尿酸水平显著升高；于实验第56天末检测血清尿酸水平与对照组比较，各组动物血清尿酸水平显著升高；组间结果比较有明显差异性，结果有统计学意义，见表1。
表1各组血清尿酸值的比较（x±s, n=12, c/mmol•Lˉ1）
0d28d56d
A组0.0469±0.0056 0.0476±0.00620.04875±0.0079
B组0.0472±0.0071 0.2457±0.0234* 0.2915±0.0158*
C组0.0467±0.0073 0.2769±0.0211*Δ0.3351±0.0220*Δ
D组 0.0483±0.00670.2980±0.0183*Δ$0.3904±0.0217*Δ$
* P<0.01与A组比较，△P<0.01与B组比较，$ P<0.01与C组比较
2.2大鼠海马组织APP的表达
高于正常水平的血清尿酸可明显增加APP 的表达，并随着血清尿酸水平的上升而升高。
图2大鼠海马组织APP表达（GAPDH作为内参照）A组：正常对照组B组：低剂量组C组：中剂量组D组：高剂量组
3 讨论
本研究采用腹腔注射氧嗪酸钾盐成功制备高尿酸血症大鼠模型[1]。研究表明，β-淀粉样蛋白沉积是AD的主要病理学特征[2]，APP表达升高，导致Aβ生成过多，并异常沉积，引发AD的发生[3]。APP的高表达参与AD发生或发展的病理过程，可作为判断AD病情轻重的生物学指标。结果显示，高尿酸血症大鼠海马组织APP表达较正常对照组明显上调，并随着血尿酸水平的升高呈上升趋势。我们前期研究证明：同条件下制备大鼠高尿酸血症模型，饲养28天后，检测大鼠海马区APP表达，结果示：高尿酸血症大鼠海马区APP的表达较正常对照组明显上调，并随着血尿酸水平的升高呈下降趋势。两次实验结果说明，清尿酸在一定范围内可以使APP的表达降低，当其水平过低或过高时均会导致神经细胞的死亡，增加AD危险性。
本实验说明，血清尿酸水平过高时，会导致AD的进行性进展，加重AD病情。成为AD的危险性因素之一。但仍需进一步研究找到最佳的浓度范围，使尿酸既可以使AD处于低风险状态，同时又可以使其他相关疾病病情稳定，这将是我们工作中研究的方向和重点。
参考文献：
[1]甘志勇, 张纯, 冯娟, 等. 尿酸酶在用氧嗪酸建立高尿酸血症模型大鼠体内的降尿酸作用[J]. 重庆医科大学学报, 2010, 35(`10):1454-1457.
[2]Hardy J, Selkoe DJ. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics[J] . Science.2002;297(5580):353-356.
[3]Hampel H, Shen Y, Walsh DM,et al .Biological markers of amyloid beta-related mechanisms in Alzheimer's disease[J]. Exp Neurol.2010Jun;223(2):334-346.
【关键词】高尿酸血症 淀粉样肽前体蛋白
【中图分类号】R-1【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2014）08-0307-01
高尿酸血症（Hyperuricemia,HUA）是一种由体内嘌呤代谢紊乱引起的疾病，主要临床表现为血清尿酸水平的升高。尿酸（Uric Acid，UA）具有抗氧化和促氧化双重性质，在多种中枢神经系统疾病中起重要作用，但尿酸与阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）之间的关系仍存在争议。
1材料与方法
1.1实验动物
山东大学实验动物中心提供的清洁级Wistar健康雄性大鼠共48只，体重（200±10）g，自由饮水与饮食。
1.2 高尿酸血症动物模型的建立
将大鼠随机分组，即正常对照组(A)、低剂量组(B)、中剂量组(C)及高剂量组(D)，每组12只大鼠。OAPS采用灭菌蒸馏水配成300、600、900 mg/kg3种剂量，利用腹腔注射氧嗪酸钾的方法，给药体积为1 ml/(100g•d)，正常对照组同时注射等体积生理盐水。
1.3血清尿酸水平测定
分别于实验第0、28、56天采用断尾取血法采集血液约1 ml，经室温自然凝血、离心，取上清液200 μl于EP管中，检测血清尿酸水平。
1.4 大鼠海马区APP的检测
于实验56天后，各组大鼠按1 ml/100g体重腹腔注射4 %水合氯醛，麻醉后剥取大鼠海马区脑组织，立即置于－80 ℃保存。测定蛋白浓度，经SDS-PAGE电泳、转印蛋白质，进行化学发光检测，使用Gel-Pro Analyzer软件分析处理，检测海马区APP的表达。
1.5统计学分析
数据采用SPSS13.0统计软件处理，结果采用均数±标准差表示，以P＜0.05为具有统计学意义。
2 结果
2.1各组动物血清尿酸水平的测定
实验第0天，各组动物血清尿酸水平比较无明显差异性。于实验第28天末检测血清尿酸水平与对照组比较，各组动物血清尿酸水平显著升高；于实验第56天末检测血清尿酸水平与对照组比较，各组动物血清尿酸水平显著升高；组间结果比较有明显差异性，结果有统计学意义，见表1。
表1各组血清尿酸值的比较（x±s, n=12, c/mmol•Lˉ1）
0d28d56d
A组0.0469±0.0056 0.0476±0.00620.04875±0.0079
B组0.0472±0.0071 0.2457±0.0234* 0.2915±0.0158*
C组0.0467±0.0073 0.2769±0.0211*Δ0.3351±0.0220*Δ
D组 0.0483±0.00670.2980±0.0183*Δ$0.3904±0.0217*Δ$
* P<0.01与A组比较，△P<0.01与B组比较，$ P<0.01与C组比较
2.2大鼠海马组织APP的表达
高于正常水平的血清尿酸可明显增加APP 的表达，并随着血清尿酸水平的上升而升高。
图2大鼠海马组织APP表达（GAPDH作为内参照）A组：正常对照组B组：低剂量组C组：中剂量组D组：高剂量组
3 讨论
本研究采用腹腔注射氧嗪酸钾盐成功制备高尿酸血症大鼠模型[1]。研究表明，β-淀粉样蛋白沉积是AD的主要病理学特征[2]，APP表达升高，导致Aβ生成过多，并异常沉积，引发AD的发生[3]。APP的高表达参与AD发生或发展的病理过程，可作为判断AD病情轻重的生物学指标。结果显示，高尿酸血症大鼠海马组织APP表达较正常对照组明显上调，并随着血尿酸水平的升高呈上升趋势。我们前期研究证明：同条件下制备大鼠高尿酸血症模型，饲养28天后，检测大鼠海马区APP表达，结果示：高尿酸血症大鼠海马区APP的表达较正常对照组明显上调，并随着血尿酸水平的升高呈下降趋势。两次实验结果说明，清尿酸在一定范围内可以使APP的表达降低，当其水平过低或过高时均会导致神经细胞的死亡，增加AD危险性。
本实验说明，血清尿酸水平过高时，会导致AD的进行性进展，加重AD病情。成为AD的危险性因素之一。但仍需进一步研究找到最佳的浓度范围，使尿酸既可以使AD处于低风险状态，同时又可以使其他相关疾病病情稳定，这将是我们工作中研究的方向和重点。
参考文献：
[1]甘志勇, 张纯, 冯娟, 等. 尿酸酶在用氧嗪酸建立高尿酸血症模型大鼠体内的降尿酸作用[J]. 重庆医科大学学报, 2010, 35(`10):1454-1457.
[2]Hardy J, Selkoe DJ. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics[J] . Science.2002;297(5580):353-356.
[3]Hampel H, Shen Y, Walsh DM,et al .Biological markers of amyloid beta-related mechanisms in Alzheimer's disease[J]. Exp Neurol.2010Jun;223(2):334-346.