超高效液相串联质谱法快速测定CYP2C9酶活性

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目的:建立一种超高效液相串联三重四级杆质谱法快速测定CYP2C9体外酶学活性检测的新方法。方法:色谱柱为ACQUITY UPLCBEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为乙腈-水(含0.1%甲酸和0.5%氨水)(40∶60),流速为0.2 ml·min-1,柱温30℃,内标为氯磺丙脲;质谱条件:电喷雾离子化源(ESI),正离子检测模式;用实验室制备的CYP2C9*1,*2,*3和*13酶在37℃孵育甲苯磺丁脲后,加入800μl冰乙酸乙酯终止反应,10 000 g离心后取有机层于氮吹仪下吹干并用200μl流动相复溶后上样。结果:4-羟基甲苯磺丁脲的保留时间为1.21 min,线性范围为0.05~5 ng·μl-1(r=0.999 8),最低定量限为0.01 ng·μl-1,回收率为99.3%~100.3%。4-羟基甲苯磺丁脲的日内、日间RSD均<5%,孵育体系中的其他内源性物质不干扰测定。CYP2C9*1,*2,*3和*13孵育甲苯磺丁脲后结果显示突变体CYP2C9*2,*3,*13的体外酶学活性分别为野生型CYP2C9*1的47.3%,11%和0.3%。结论:该方法快速、稳定,该方法操作简便,适于CYP2C9的快速活性检测及抑制药等的相关性研究。
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