【摘 要】
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应用PCR的方法从C4植物高粱的基因组中分离出C4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(Ppc基因)。通过分步克隆的方法,将此基因插入pCAMBIA1301质粒载体上,构成重组的表达载体p1301-P
【机 构】
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中国科学院遗传与发育生物学研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所,中国科学院植物研究所,中国科学院植物研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所 北京 100080,
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应用PCR的方法从C4植物高粱的基因组中分离出C4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(Ppc基因)。通过分步克隆的方法,将此基因插入pCAMBIA1301质粒载体上,构成重组的表达载体p1301-PEPC,并利用农杆菌介导的转化系统将其转入农垦58和中花10两个粳稻品种。经PCR分析、PEPCase活性检测、Western杂交、Northern杂交和Southern杂交等多种方法鉴定表明,C4型Ppc基因已转化进受体水稻植株的核基因组,并能高水平表达。生理学检测显示,转基因水稻植株的CO_2朴偿点和光呼吸速率显著降低,光饱和光合速率和羧化效率提高,显示出C4植物的光合特征。
The C4 phosphoenolpyruvate carboxylase gene (Ppc gene) was isolated from the genome of C4 plant sorghum by PCR. The recombinant plasmid p1301-PEPC was inserted into pCAMBIA1301 plasmid by step-by-step cloning. The recombinant plasmid p1301-PEPC was transformed into Nongken 58 and Zhonghua 10 by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation system. The results of PCR analysis, PEPCase activity assay, Western blot, Northern blot and Southern blot showed that the C4 Ppc gene has been transformed into the nuclear genome of recipient rice plants and expressed at high level. Physiological tests showed that CO 2 plant shoots and photosynthetic respiration rates of transgenic rice plants were significantly decreased, photosynthetic rate and carboxylation efficiency were increased, showing the photosynthetic characteristics of C4 plants.
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