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采用０．６％纤维素酶加０．６％蜗牛酶的混合酶由扩展青霉Ｋ４０中获得大量的原生质体，并比较了菌龄、二硫苏糖醇（ＤＴＴ）预处理方式、酶解时间、温度、ｐＨ、培养基成分及稳定剂等因素对原生质体的形成和再生的作用。选出制备原生质体的最适条件：０．６％纤维素酶＋０．６％蜗牛酶，在０．６ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ＋０．３％ＣａＣｌ２，ＤＴＴ预处理０．５ｈ，菌龄为１９～２０ｈ，ｐＨ５．４，２８℃酶解３～３．５ｈ，原生质