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“没有比较就没有鉴别”。这是生物学实验设计过程中应遵循的原则，即对照性原则。而在很多实验设计中，一次对照往往显得证据不足，因此就有了二次对照的做法，这样就会使实验设计更加严密、可靠。所谓“二次对照”，即是“在第一次对照的基础上，设法让可能导致某种结果的原因消除后，相应的结果也随之消失，从而使结论更具说服力”的一种对照方法。二次对照的做法在有关植物、动物及微生物的实验中皆有出现，在此通过例举与各位探讨。