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摘要 [目的]建立蔬菜中多菌灵等15种农药残留检测方法。[方法]分别采用高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-串联质谱法（LC/MS/MS）对不同蔬菜中多菌灵等15种农药残留进行检测。[结果]2种试验检测方法，多菌灵等部分农药残留量检测结果存在一定差异，这是蔬菜样品基质干扰所致。[结论]LC/MS/MS方法质谱抗干扰能力强、稳定、可靠，使用简便快速、分析时间短；HPLC方法需要更好的方法优化才能得到更可靠的检测结果。
关键词 HPLC；LC/MS/MS；农药残留；多菌灵
中图分类号 S481+.8 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）25-08593-05
Abstract [Objective] The aim was to establish determination methods for 15 kinds of pesticides residues in vegetables. [Method] The residues of 15 kinds of pesticides in vegetables were determined by HPLC and LC/MS/MS. [Result] Through the two kinds of different analysis methods， there were obvious differences in several pesticide residue detection results， such as avermectins， which should be caused by different vegetable sample matrixs interference by HPLC method. [Conclusion] HPLC method needed better methods to optimize in order to get more reliable results， while LC/MS/MS method was simple and quick， had short analysis time with strong antiinterference ability by mass spectrometry， and so it was known as a stable and reliable detection method.
Key words HPLC； LC/MS/MS； Pesticide residue； Carbendazim
随着食品事件频发，食品安全受到高度关注，政府各级部门加强对食品监管，针对不同食品开展检测项目。目前，蔬菜、水果、茶叶等初级农产品的农药残留开展最普遍。农药残留检测工作是一项操作性很强的技术工作，现阶段农药残留检测主要采用气相色谱议、液相色谱议、气相色谱-串联质谱议、液相色谱-串联质谱议。同一农药参数有时可以多种方法与仪器进行检测，但不同样品基质、不同人员、不同仪器造成结果往往存在一定偏差。鉴于此，笔者结合农业部开展的全国农产品安全例行监测和广东省农产品质量安全监测工作，采用HPLC和LC/MS/MS 2种方法对不同蔬菜中多菌灵等15种农药残留进行了检测，旨在为相关部门开展农药残留检测工作提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器。美国Agilent 1200高效液相色谱仪（HPLC），配有紫外和荧火检测器，并配有柱后衍生系统；1200RRLC/6410BQQQESI液相-质谱联用仪（LC/MS/MS）。
1.1.2 试剂。SPE小柱（500 mg/6ml氨基柱）；乙腈、甲醇、二氯甲烷等试剂均为色谱纯。
1.1.3 药剂。涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、多菌灵、三羟基克百威、吡虫啉、啶虫脒、涕灭威、克百威、甲萘威、除虫脲、灭幼脲、氟虫腈、辛硫磷、阿维菌素15种农药标准品（浓度为1 000 mg/L）均购自农业部环境质量监督检验测试中心（天津）。
1.2 方法
1.2.1 标准溶液的配制。
1.2.1.1 单一农药标准储备溶液的配制。
称取一定量某农药标准品，用甲醇逐一稀释，配制成15种农药100 mg/L的单一农药标准储备溶液，贮存在-18 ℃以下冰箱中。使用时吸取适量标准储备溶液，稀释配成所需标准工作溶液。
1.2.1.2 农药混合标准溶液的配制。
逐一吸取一定体积的单一农药储备溶液分别注入同一容瓶中，用甲醇稀释至刻度。
1.2.2 提取。
称取20.0 g样品于100 ml离心管中，加入40.0 ml乙腈，匀浆1 min，加入5.0 g氯化钠，再匀浆1 min，于8 000 r/min下离心3 min。
1.2.3 净化。
1.2.3.1
HPLC。取“1.2.2”上清液10.0 ml于70 ℃水浴氮吹仪上氮吹至近干，加入2 ml甲醇+二氯甲烷（1+99），待净化。将氨基柱用4.0 ml甲醇+二氯甲烷（1+99）预洗，当溶液面到达柱吸附层表面时，立即加入上述待净化样品，用2.0 ml甲醇+二氯甲烷（1+99）洗刻度离心管后过柱，并重复1次。将刻度离心管置于50 ℃水浴氮吹仪上氮吹至近干，用甲醇定容至2.5 ml，混匀，经0.2 μm滤膜过滤后，待测。
1.2.3.2 LC/MS/MS。取“1.2.2”上清液1.0 ml置于装有0.2 g无水硫酸镁和0.1 g N丙基乙二胺（PSA）的10 ml离心管中，8 000 r/min离心3 min。将净化提取液转移至带有刻度离心中并标记刻度，于70 ℃水浴氮吹仪上氮吹至少于0.3 ml，用甲醇+水（1+1）定容至标记刻度，经0.2 μm滤膜过滤后，待测。 1.2.4 色谱测定方法。
1.2.4.1 HPLC。分别吸取20.0 μl标准溶液、按“1.2.3”净化后的样品溶液注入Agilent 1200 HPLC中，采用外标法以样品溶液峰面积比较定量。
1.2.4.2 LC/MS/MS。分别吸取5.0 μl标准溶液、按“1.2.3”净化后的样品溶液注入Agilent 1200 RRLC/6410 BQQQESI LC/MS/MS中，以保留时间、离子对比例定性，采用外标法以样品溶液峰面积与标准溶液定量离子峰面积比较定量。
1.2.5 仪器分析条件。
1.2.5.1 HPLC分析条件。灭多威等7种氨基甲酸类农药及其代谢产物仪器测定条件：Agilent HPLC1200荧光检测器，柱后衍生系统；Agilent SBC18（250 mm×4.6 mm×5 μm）；分析时间：30 min；流速：1.0 ml/min；波长：λex330 nm，λex465 nm；柱后衍生：0.05 mol/L氢氧化钠标准溶液，流速0.2 ml/min，OPA试剂，流速0.2 ml/min；水解温度：100 ℃；衍生温度：室温；流动相见表1。
多菌灵等8种农药仪器测定条件：Agilent HPLC1200 紫外检测器；Waters XBridge C18（250.0 mm×4.6 mm×5 μm）；分析时间：35 min；流速：1.0 ml/min；流动相见表2。
1.2.5.2 LC/MS/MS分析条件。Agilent 1200RRLC/6410BQQQESI；色谱柱：ZORBAX SBC18（3.0×150 mm 1.8Micron）；柱温：30 ℃；流速：0.3 ml/min；电离源模式：ESI；雾化气：氮气；雾化气压力：40 Psi；离子喷雾电压：3 000 V；干燥气温度：350 ℃；干燥气流量：10.0 L/min。各农药质谱参数见表3，流动相见表4。
3 讨论
随着人民生活水平不断提高，对生活质量要求也越来越
高，食品质量安全意识和要求也在不断提高。近年来，食品安全事故频发，更加引起人民和社会的关注。特别是农副产品中农药残留量的问题越来越引起普遍关注并呼唤农药残毒的监控检测。为了保证人民安全，扩大农产品出口贸易，各级政府高度重视农产品中农药残留问题，加强农药残留检测完善监控体系，全国各地都在积极组织开展农药残留监测工作，目前已取得一定成效。
HPLC检测易造成基质干扰严重，在日常监测工作中易出现以下几方面问题：检测结果误判；造成个别农药重现性不好（如多菌灵、阿维菌素、除虫脲）；干扰严重无法进行定量；多数回收率偏高[1]。而该研究中HPLC试验条件已经证验，可确保各农药组分得到较好的灵敏度和分离效果。
目前大多数检验机构，特别是基屋农产品检验机构，都认为采用HPLC很难开展多种农药残留检测，在未能争取配置LC/MS的情况下，对开展农药残留检测工作采取消极态度。但LC/MS或LC/MS/MS等仪器设备均为进口仪器，价格昂贵且仪器使用和维护成本高，当前县（市）一级基层农产品质量安全检测机构的使用频率也不高，容易造成浪费。从目前的实际情况来看，HPLC和LC/MS/MS检测农药残留量时，所得结果在个别农药品种上可能存在较大差异，这主要是试验方法未能进行良好优化所造成的。因此，在利用HPLC进行蔬菜中农药残留检测时，要深入研究各种蔬菜基质干扰效应，充分优化检测方法前处理方法和配置检测仪器具体的分离测定条件。
参考文献
[1] 江燕玲，成秀娟，魏燕秋，等.有机磷农药残留量检测过程中基质效应研究[J].农药科学与管理，2012，33（2）：25-29.
关键词 HPLC；LC/MS/MS；农药残留；多菌灵
中图分类号 S481+.8 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）25-08593-05
Abstract [Objective] The aim was to establish determination methods for 15 kinds of pesticides residues in vegetables. [Method] The residues of 15 kinds of pesticides in vegetables were determined by HPLC and LC/MS/MS. [Result] Through the two kinds of different analysis methods， there were obvious differences in several pesticide residue detection results， such as avermectins， which should be caused by different vegetable sample matrixs interference by HPLC method. [Conclusion] HPLC method needed better methods to optimize in order to get more reliable results， while LC/MS/MS method was simple and quick， had short analysis time with strong antiinterference ability by mass spectrometry， and so it was known as a stable and reliable detection method.
Key words HPLC； LC/MS/MS； Pesticide residue； Carbendazim
随着食品事件频发，食品安全受到高度关注，政府各级部门加强对食品监管，针对不同食品开展检测项目。目前，蔬菜、水果、茶叶等初级农产品的农药残留开展最普遍。农药残留检测工作是一项操作性很强的技术工作，现阶段农药残留检测主要采用气相色谱议、液相色谱议、气相色谱-串联质谱议、液相色谱-串联质谱议。同一农药参数有时可以多种方法与仪器进行检测，但不同样品基质、不同人员、不同仪器造成结果往往存在一定偏差。鉴于此，笔者结合农业部开展的全国农产品安全例行监测和广东省农产品质量安全监测工作，采用HPLC和LC/MS/MS 2种方法对不同蔬菜中多菌灵等15种农药残留进行了检测，旨在为相关部门开展农药残留检测工作提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器。美国Agilent 1200高效液相色谱仪（HPLC），配有紫外和荧火检测器，并配有柱后衍生系统；1200RRLC/6410BQQQESI液相-质谱联用仪（LC/MS/MS）。
1.1.2 试剂。SPE小柱（500 mg/6ml氨基柱）；乙腈、甲醇、二氯甲烷等试剂均为色谱纯。
1.1.3 药剂。涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、多菌灵、三羟基克百威、吡虫啉、啶虫脒、涕灭威、克百威、甲萘威、除虫脲、灭幼脲、氟虫腈、辛硫磷、阿维菌素15种农药标准品（浓度为1 000 mg/L）均购自农业部环境质量监督检验测试中心（天津）。
1.2 方法
1.2.1 标准溶液的配制。
1.2.1.1 单一农药标准储备溶液的配制。
称取一定量某农药标准品，用甲醇逐一稀释，配制成15种农药100 mg/L的单一农药标准储备溶液，贮存在-18 ℃以下冰箱中。使用时吸取适量标准储备溶液，稀释配成所需标准工作溶液。
1.2.1.2 农药混合标准溶液的配制。
逐一吸取一定体积的单一农药储备溶液分别注入同一容瓶中，用甲醇稀释至刻度。
1.2.2 提取。
称取20.0 g样品于100 ml离心管中，加入40.0 ml乙腈，匀浆1 min，加入5.0 g氯化钠，再匀浆1 min，于8 000 r/min下离心3 min。
1.2.3 净化。
1.2.3.1
HPLC。取“1.2.2”上清液10.0 ml于70 ℃水浴氮吹仪上氮吹至近干，加入2 ml甲醇+二氯甲烷（1+99），待净化。将氨基柱用4.0 ml甲醇+二氯甲烷（1+99）预洗，当溶液面到达柱吸附层表面时，立即加入上述待净化样品，用2.0 ml甲醇+二氯甲烷（1+99）洗刻度离心管后过柱，并重复1次。将刻度离心管置于50 ℃水浴氮吹仪上氮吹至近干，用甲醇定容至2.5 ml，混匀，经0.2 μm滤膜过滤后，待测。
1.2.3.2 LC/MS/MS。取“1.2.2”上清液1.0 ml置于装有0.2 g无水硫酸镁和0.1 g N丙基乙二胺（PSA）的10 ml离心管中，8 000 r/min离心3 min。将净化提取液转移至带有刻度离心中并标记刻度，于70 ℃水浴氮吹仪上氮吹至少于0.3 ml，用甲醇+水（1+1）定容至标记刻度，经0.2 μm滤膜过滤后，待测。 1.2.4 色谱测定方法。
1.2.4.1 HPLC。分别吸取20.0 μl标准溶液、按“1.2.3”净化后的样品溶液注入Agilent 1200 HPLC中，采用外标法以样品溶液峰面积比较定量。
1.2.4.2 LC/MS/MS。分别吸取5.0 μl标准溶液、按“1.2.3”净化后的样品溶液注入Agilent 1200 RRLC/6410 BQQQESI LC/MS/MS中，以保留时间、离子对比例定性，采用外标法以样品溶液峰面积与标准溶液定量离子峰面积比较定量。
1.2.5 仪器分析条件。
1.2.5.1 HPLC分析条件。灭多威等7种氨基甲酸类农药及其代谢产物仪器测定条件：Agilent HPLC1200荧光检测器，柱后衍生系统；Agilent SBC18（250 mm×4.6 mm×5 μm）；分析时间：30 min；流速：1.0 ml/min；波长：λex330 nm，λex465 nm；柱后衍生：0.05 mol/L氢氧化钠标准溶液，流速0.2 ml/min，OPA试剂，流速0.2 ml/min；水解温度：100 ℃；衍生温度：室温；流动相见表1。
多菌灵等8种农药仪器测定条件：Agilent HPLC1200 紫外检测器；Waters XBridge C18（250.0 mm×4.6 mm×5 μm）；分析时间：35 min；流速：1.0 ml/min；流动相见表2。
1.2.5.2 LC/MS/MS分析条件。Agilent 1200RRLC/6410BQQQESI；色谱柱：ZORBAX SBC18（3.0×150 mm 1.8Micron）；柱温：30 ℃；流速：0.3 ml/min；电离源模式：ESI；雾化气：氮气；雾化气压力：40 Psi；离子喷雾电压：3 000 V；干燥气温度：350 ℃；干燥气流量：10.0 L/min。各农药质谱参数见表3，流动相见表4。
3 讨论
随着人民生活水平不断提高，对生活质量要求也越来越
高，食品质量安全意识和要求也在不断提高。近年来，食品安全事故频发，更加引起人民和社会的关注。特别是农副产品中农药残留量的问题越来越引起普遍关注并呼唤农药残毒的监控检测。为了保证人民安全，扩大农产品出口贸易，各级政府高度重视农产品中农药残留问题，加强农药残留检测完善监控体系，全国各地都在积极组织开展农药残留监测工作，目前已取得一定成效。
HPLC检测易造成基质干扰严重，在日常监测工作中易出现以下几方面问题：检测结果误判；造成个别农药重现性不好（如多菌灵、阿维菌素、除虫脲）；干扰严重无法进行定量；多数回收率偏高[1]。而该研究中HPLC试验条件已经证验，可确保各农药组分得到较好的灵敏度和分离效果。
目前大多数检验机构，特别是基屋农产品检验机构，都认为采用HPLC很难开展多种农药残留检测，在未能争取配置LC/MS的情况下，对开展农药残留检测工作采取消极态度。但LC/MS或LC/MS/MS等仪器设备均为进口仪器，价格昂贵且仪器使用和维护成本高，当前县（市）一级基层农产品质量安全检测机构的使用频率也不高，容易造成浪费。从目前的实际情况来看，HPLC和LC/MS/MS检测农药残留量时，所得结果在个别农药品种上可能存在较大差异，这主要是试验方法未能进行良好优化所造成的。因此，在利用HPLC进行蔬菜中农药残留检测时，要深入研究各种蔬菜基质干扰效应，充分优化检测方法前处理方法和配置检测仪器具体的分离测定条件。
参考文献
[1] 江燕玲，成秀娟，魏燕秋，等.有机磷农药残留量检测过程中基质效应研究[J].农药科学与管理，2012，33（2）：25-29.