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[摘要](1)阐明了双缩脲法是目前国内外检测血清总蛋白和白蛋白最常用的方法；(2)明确检测血清总蛋白和白蛋白的分析性能要求；(3)强调血清总蛋白和白蛋白检测时的标本采集和保存要求。
[关键词]血清总蛋白
白蛋白
检测方法综述
蛋白质在所有生命活动过程中起着极其重要的作用，据估计，迄今为止，人体内大约有50000多种蛋白质，而一个人体细胞内的蛋白质就达3000～5000种。目前能识别的蛋白质已超过1400种，就连单细胞的细菌蛋白也多达3000多种。在诸多蛋白中，被用于样品检测和临床辅助诊断率最高的是血清总蛋白和白蛋白，其主要检测标本有：血液、尿液、脑脊髓液、羊水、唾液、胸腔积液、腹腔积液以及粪便等。
1.血清总蛋白(total protein)检测
1.1检测总蛋白的主要方法
1.1.1双缩脲法(biuret method)利用蛋白质分子中的肽键(一CONH一)能与双缩脲试剂(biuret teagent)中的CU2+结合产生紫色复合物，在波长540nm处检测吸收峰。双缩脲法是检测血清蛋白的经典方法，经Doumas改良后的双缩脲试剂被美国临床化学协会标准化委员会和美国标准局(National Bureau of standards，即现在的美国标准计量研究所，NST)选用，作为血清蛋白检测标准化实验试剂，试剂在室内保存一年内不影响检测结果。
1.1.2直接光度检测法(direct photometric method)
本法利用血清蛋白在一定紫外光波内有特异吸收峰(uv280nm)这一特点检测样品蛋白，此法常用于脑脊髓液蛋白的测定。
1.1.3
染料结合法(dye-binding method)检测样品蛋白
本法根据某些特殊染料(氨基黑10B和考马斯蓝Coomassic Br illiant blue CBB)能与多肽链中氨基酸残基的质子化基团结合，在460～595nm处有一光吸收峰的特点检测样品蛋白。该检测方法操作简便，快速、灵敏、特异性好、精密度高，且需要样品量少。很适合用于尿液、脑脊髓液蛋白的检测。但不精确可达到：批问CV≤5.5％(2.4g／L)，线性可达15g／L。
1.1.4 Folin-Lowty法检测样品蛋白
利用蛋白质分子中含有酪氨酸和色氨酸残基能与LOWTY试剂形成蓝色化合物，并在650～750nm处有特异光吸收峰，该法主要用于科研中检测组织蛋白，纯化蛋白以及含量极低(双缩脲法不易测到)的蛋白质，此法不适用于脑脊髓液蛋白的测定。
1.1.5非免疫化学比浊法
此法的检测原理是利用某些有机酸(黄基水杨酸、三氯醋酸等)或无机酸与蛋白质形成的浊度测定其蛋白质，多用于尿液、唾胸腹中蛋白的检测，但本法不适用于脑脊髓液蛋白的检测。
1.2检测总蛋白的分析性能要求
临床对定量检测血清，尿液或脑髓液中总蛋白的分析性能要求一般应达到：(1)不精密度，可接受的批内系数(CV≤3％)；批问(CV≤5％)。(2)不准确度：同类型试剂的方法学比较，在可检测范围的系数误差偏倚≤5％。(3)患者结果的可报告范围：双缩脲试剂的可检测范围一般为7.O～150g／L，在上线处的实际测定什和预测什的误差≤4％。
1.3检测血清总蛋白的检测标本要求
未溶血和无血细胞的血清、血浆、脑脊髓液、尿液、胸、腹水积液等均可列入被检测标本，其检测标本的具体要求是：(1)同份样品，血浆检测出来的结果高于血清2.5～3.6g／L(II~浆中含纤维蛋白质)，因此，以血清作为检测样本为佳；(2)采血时静脉止血带结扎时间不宜超过3min，超过则结果偏高；(3)静脉采血以卧式为宜，站立位采血结果偏高10～15％；(4)运动后采血结果偏高约12％；(5)血清或脑脊髓液在有盖试管中室温可保存3d，2～8℃可保存7天，一700c可长期保存。保存标本量应不少于100ul，且不宜反复和多次冻融。
1.4检测总蛋白的标准品
到目前为止，尽管AACC(美国临床化学协会)作了很大努力，实验中应用的HAS(人血清白蛋白)和BSA(牛血清白蛋白)仍无法达到血清标本蛋白的标准品，而AACC标准化委员会蛋白研究小组最终选定BSA为标准品，是考虑到可商品化供应、价格低廉且检测结果更接近真实性。
2.血清白蛋白(albumin)检测
20世纪70年代人类解读了人白蛋白由585个氨基酸组成，相对分子质量为663000，每天合成量约为150～250mg／kg体重，占肝脏蛋白合成能力的12～20％，白蛋白是体内转运各种物质的载体，是维持渗透压平衡，生长发育、组织更新、修复等的重要生命物质。
2.1检测方法
2.1.1染料结合法
检测原理是利和溴甲酚绿(bromcresol greenBCG)与白蛋白结合形成蓝绿色复合物，并在628nm处有一光吸收峰，与已知标准品比较得未知检测样品蛋白含量；二是利用溴甲酚紫(brom cresol purple BCP)与白蛋白结合生成绿色复合物，并在603 nm处有一吸收峰，与标准比较求得待测样品蛋白含量。据统计资料表明，美国采用两种方法检测白蛋白各占50％，同一样品用BCG检测到的结果只比BCP法没到的高1.9～3.9g／L(在正常参考值范围内)，不影响检测样品的真实结果。两法测定具有简单、快捷、低廉，适用于自动化分析，是临床检测大量标本的重要常用手段。但不适用于胸、腹腔积液蛋白的检测(结果偏高)；(2)肝脏患者病人宜用BCG法，不宜BCG法(测定结果偏高)；(3)溶血标本、胆红素、甘油酯偏高的患者不宜用BCG和BCP法检测，如必须采用上述两种方法检测白蛋白时，尽量选用人血清的校准品为标准，这样可以抵消样品中非白蛋白的干扰，提高检测结果的准确性。
2.1.2免疫分析法
采用此法检测血清白蛋白比染料结合法更准确、灵敏，同样适用于自动化分析，但成本偏高。此法多用于定量分析和尿液、脑脊髓液中白蛋白的检测。
2.1.3电泳检测法
主要有醋酸纤维薄膜法和琼脂凝胶电泳法，但两法测定的结果与染料结合法的结果出入较大，与样品含量的真实值有差异，因此，在临床检测中应用相对较少。
2.2血清白蛋白检测的分析性能要求
临床对宣检测血清白蛋白的分析性能要求：(1)不精密度(BCG法和BCP法)可接受范围的批内CV≤3％；批问CV≤4％；免疫化学法(免疫比浊)的批内CV通常<5％；(2)不准确度：同类型试剂的方法学比较，在可报告范围的系统误差偏倚≤5％。
2.3标本采集要求
(1)未溶血无细胞的血清(浆)、尿液、脑脊髓液、胸腹水积液等均可列为检测标本；(2)静脉采血时，结扎带结扎的埋单不宜超过3min，(3min检测结果偏高约10％)；(3)站立式采血结果比卧式采血结果约偏高10～15％；(4)肌肉运动后采血可使结果偏高约12％；(5)血清、脑脊髓液在有盖的试管中室温可保存3d，2～8℃可储存7天；一700c可长期保存，每次保存标本不应少于100ul，标本应尽量避免反复和多次冻融，影响复检蛋白的结果。
[关键词]血清总蛋白
白蛋白
检测方法综述
蛋白质在所有生命活动过程中起着极其重要的作用，据估计，迄今为止，人体内大约有50000多种蛋白质，而一个人体细胞内的蛋白质就达3000～5000种。目前能识别的蛋白质已超过1400种，就连单细胞的细菌蛋白也多达3000多种。在诸多蛋白中，被用于样品检测和临床辅助诊断率最高的是血清总蛋白和白蛋白，其主要检测标本有：血液、尿液、脑脊髓液、羊水、唾液、胸腔积液、腹腔积液以及粪便等。
1.血清总蛋白(total protein)检测
1.1检测总蛋白的主要方法
1.1.1双缩脲法(biuret method)利用蛋白质分子中的肽键(一CONH一)能与双缩脲试剂(biuret teagent)中的CU2+结合产生紫色复合物，在波长540nm处检测吸收峰。双缩脲法是检测血清蛋白的经典方法，经Doumas改良后的双缩脲试剂被美国临床化学协会标准化委员会和美国标准局(National Bureau of standards，即现在的美国标准计量研究所，NST)选用，作为血清蛋白检测标准化实验试剂，试剂在室内保存一年内不影响检测结果。
1.1.2直接光度检测法(direct photometric method)
本法利用血清蛋白在一定紫外光波内有特异吸收峰(uv280nm)这一特点检测样品蛋白，此法常用于脑脊髓液蛋白的测定。
1.1.3
染料结合法(dye-binding method)检测样品蛋白
本法根据某些特殊染料(氨基黑10B和考马斯蓝Coomassic Br illiant blue CBB)能与多肽链中氨基酸残基的质子化基团结合，在460～595nm处有一光吸收峰的特点检测样品蛋白。该检测方法操作简便，快速、灵敏、特异性好、精密度高，且需要样品量少。很适合用于尿液、脑脊髓液蛋白的检测。但不精确可达到：批问CV≤5.5％(2.4g／L)，线性可达15g／L。
1.1.4 Folin-Lowty法检测样品蛋白
利用蛋白质分子中含有酪氨酸和色氨酸残基能与LOWTY试剂形成蓝色化合物，并在650～750nm处有特异光吸收峰，该法主要用于科研中检测组织蛋白，纯化蛋白以及含量极低(双缩脲法不易测到)的蛋白质，此法不适用于脑脊髓液蛋白的测定。
1.1.5非免疫化学比浊法
此法的检测原理是利用某些有机酸(黄基水杨酸、三氯醋酸等)或无机酸与蛋白质形成的浊度测定其蛋白质，多用于尿液、唾胸腹中蛋白的检测，但本法不适用于脑脊髓液蛋白的检测。
1.2检测总蛋白的分析性能要求
临床对定量检测血清，尿液或脑髓液中总蛋白的分析性能要求一般应达到：(1)不精密度，可接受的批内系数(CV≤3％)；批问(CV≤5％)。(2)不准确度：同类型试剂的方法学比较，在可检测范围的系数误差偏倚≤5％。(3)患者结果的可报告范围：双缩脲试剂的可检测范围一般为7.O～150g／L，在上线处的实际测定什和预测什的误差≤4％。
1.3检测血清总蛋白的检测标本要求
未溶血和无血细胞的血清、血浆、脑脊髓液、尿液、胸、腹水积液等均可列入被检测标本，其检测标本的具体要求是：(1)同份样品，血浆检测出来的结果高于血清2.5～3.6g／L(II~浆中含纤维蛋白质)，因此，以血清作为检测样本为佳；(2)采血时静脉止血带结扎时间不宜超过3min，超过则结果偏高；(3)静脉采血以卧式为宜，站立位采血结果偏高10～15％；(4)运动后采血结果偏高约12％；(5)血清或脑脊髓液在有盖试管中室温可保存3d，2～8℃可保存7天，一700c可长期保存。保存标本量应不少于100ul，且不宜反复和多次冻融。
1.4检测总蛋白的标准品
到目前为止，尽管AACC(美国临床化学协会)作了很大努力，实验中应用的HAS(人血清白蛋白)和BSA(牛血清白蛋白)仍无法达到血清标本蛋白的标准品，而AACC标准化委员会蛋白研究小组最终选定BSA为标准品，是考虑到可商品化供应、价格低廉且检测结果更接近真实性。
2.血清白蛋白(albumin)检测
20世纪70年代人类解读了人白蛋白由585个氨基酸组成，相对分子质量为663000，每天合成量约为150～250mg／kg体重，占肝脏蛋白合成能力的12～20％，白蛋白是体内转运各种物质的载体，是维持渗透压平衡，生长发育、组织更新、修复等的重要生命物质。
2.1检测方法
2.1.1染料结合法
检测原理是利和溴甲酚绿(bromcresol greenBCG)与白蛋白结合形成蓝绿色复合物，并在628nm处有一光吸收峰，与已知标准品比较得未知检测样品蛋白含量；二是利用溴甲酚紫(brom cresol purple BCP)与白蛋白结合生成绿色复合物，并在603 nm处有一吸收峰，与标准比较求得待测样品蛋白含量。据统计资料表明，美国采用两种方法检测白蛋白各占50％，同一样品用BCG检测到的结果只比BCP法没到的高1.9～3.9g／L(在正常参考值范围内)，不影响检测样品的真实结果。两法测定具有简单、快捷、低廉，适用于自动化分析，是临床检测大量标本的重要常用手段。但不适用于胸、腹腔积液蛋白的检测(结果偏高)；(2)肝脏患者病人宜用BCG法，不宜BCG法(测定结果偏高)；(3)溶血标本、胆红素、甘油酯偏高的患者不宜用BCG和BCP法检测，如必须采用上述两种方法检测白蛋白时，尽量选用人血清的校准品为标准，这样可以抵消样品中非白蛋白的干扰，提高检测结果的准确性。
2.1.2免疫分析法
采用此法检测血清白蛋白比染料结合法更准确、灵敏，同样适用于自动化分析，但成本偏高。此法多用于定量分析和尿液、脑脊髓液中白蛋白的检测。
2.1.3电泳检测法
主要有醋酸纤维薄膜法和琼脂凝胶电泳法，但两法测定的结果与染料结合法的结果出入较大，与样品含量的真实值有差异，因此，在临床检测中应用相对较少。
2.2血清白蛋白检测的分析性能要求
临床对宣检测血清白蛋白的分析性能要求：(1)不精密度(BCG法和BCP法)可接受范围的批内CV≤3％；批问CV≤4％；免疫化学法(免疫比浊)的批内CV通常<5％；(2)不准确度：同类型试剂的方法学比较，在可报告范围的系统误差偏倚≤5％。
2.3标本采集要求
(1)未溶血无细胞的血清(浆)、尿液、脑脊髓液、胸腹水积液等均可列为检测标本；(2)静脉采血时，结扎带结扎的埋单不宜超过3min，(3min检测结果偏高约10％)；(3)站立式采血结果比卧式采血结果约偏高10～15％；(4)肌肉运动后采血可使结果偏高约12％；(5)血清、脑脊髓液在有盖的试管中室温可保存3d，2～8℃可储存7天；一700c可长期保存，每次保存标本不应少于100ul，标本应尽量避免反复和多次冻融，影响复检蛋白的结果。