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摘要：目的：研究中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）活性测定在血液病鉴别诊断中的应用价值。
方法：采集215例血液病患者和30名健康人的静脉血制备血涂片，经Kaplow偶氮偶联法进行NAP细胞化学染色，显微镜油镜观察100个成熟中性粒细胞，以五级积分值记录结果。
结果：急性淋巴细胞白血病（ALL）、类白血病反应（LR）、再生障碍性贫血（AA）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、多发性骨髓瘤（MM），真性红细胞增多症（PV）6组疾病NAP积分明显高于对照组（P<0.01）；CLL、恶性组织细胞病（MH）、骨髓增生异常综合征（MDS-RAEBT）、阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）4组疾病NAP积分明显低于上述6组疾病和对照组（P<0.01）；AML NAP积分略低于对照组，但差异无显著性（P>0.05），与ALL比较差异有高度显著性（P<0.01）。
结论：NAP活性测定可支持血液病的鉴别诊断。
关键词：碱性磷酸酶 血液病
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.274
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2013）08-0246-01
碱性磷酸酶主要见于成熟中性粒细胞、网状细胞和吞噬细胞，其他细胞皆为阴性反应。总结我院血液科215例血液病人的中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）活性观察，进行对比分析，以探讨NAP在血液病中鉴别诊断的应用价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料。本组215例血液病均来源于我院血液科2010～2013年经骨髓涂片细胞学分析、病理检查及有关实验室检查并结合临床参照文献[1]确诊病例，其中再生障碍性贫血（AA）47例、骨髓增生异常综合征（MDS-RAEBT）5例、真性红细胞增多症（PV）4例、急性髓细胞白血病（AML）69例、急性淋巴细胞白血病（ALL）50例、恶性组织细胞病（MH）3例、类白血病反应（LR）13例、阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）4例、慢性粒细胞白血病（CML）13例、多发性骨髓瘤（MM）4例、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）3例。健康人群30例为对照组，其中男18例，女12例。患者和健康人群均采集静脉血制备血涂片2张。
1.2 试剂。Kaplow 偶氮偶联法：①固定液：25%甲醛乙醇溶液；②丙二醇缓冲液：0.05 mmol/L 2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇溶液（pH9.75）；③基质孵育液（pH9.4-9.6新鲜配制）：α-磷酸萘酚钠20mg溶于缓冲液20ml，再加入坚牢蓝RR 20mg；④苏木素复染液。细胞染色方法：新鲜血片用固定液冷固定（4～10℃）30s，水洗、晾干后放入基质孵育液（按上述方法新鲜配制）中，37℃温浴30min，流水冲洗，晾干后苏木素复染液复染5min，水洗、 晾干。显微镜油镜观察100个成熟中性粒细胞，按每个细胞浆内颗粒多少分成五级：（-）、（1+）、（2+）、（3+）、（4+），用半定量记分法，以积分值记录结果[2]。
1.3 统计学处理。计量数据以X±S表示，应用SPSS 10.0统计软件，行单因素方差分析，以α=0.05为检验标准。
2 结果
2.1 对照组与血液病患者NAP积分结果对比。AA、LR和ALL等的NAP积分显著高于对照组；MDS-RAEBT、CML、MH、PNH的NAP积分明显低于对照组，其中MH和CML的NAP积分最低；AML的NAP积分略低于对照组，但差异无显著性。
2.2 LSD及S-N-K多重比较结果。AA与PNH的NAP积分差异有高度显著性（t=4.95，P<0.01）；NAP积分在LR与CML组间（t=16.62）、ALL与AML组间（t=15.08）、MH与MM组间（t=4.11）、CLL与CML组间（t=59.34）差异均有高度显著性（P<0.01），这与杨晓春等人的研究结果一致。
3 讨论
NAP是成熟粒细胞S颗粒释放的一种酶，其活力与成熟粒细胞的成熟程度和功能、感染的程度、细菌或病毒的种类有关[2]。在严重细菌感染，LR、AA、ALL、CML急性变，PV、MM等疾病中NAP活性增高；在CML、MH、MDS-RAEBT、DNH、继发性红细胞增多症等疾病中NAP活性减低。
本组资料显示，在215例血液病中各组疾病NAP的活性积分与对照组比较：ALL、LR、AA、MM均明显高于对照组；MDS-RAEBT、CML、MH、PNH均明显低于对照组。而在各组疾病的鉴别诊断，如PNH与AA的鉴别：前者降低，后者显著增高，AA者中性粒细胞越低，贫血越重，NAP则越高。经过观察，AA在缓解时NAP积分有下降趋势，但很难恢复正常。ALL与AML的鉴别中，前者NAP活性增多明显，后者NAP活性正常或略低。CML与LR的鉴别中，前者明显降低，后者明显增高[4]。MH与反应性组织细胞增生症差异有显著性，前者降低，后者增高。
综上所述，NAP的活性对于血液病的鉴别诊断有重要临床价值。
参考文献
[1] 张之南.血液病诊断及疗效标准[M].天津：天津科学技术出版社，1991：1
[2] 陈方平，覃西.血液学检验[M].2版.北京：人民卫生出版社，2003：48-49
[3] 杨晓春.中性粒细胞碱性磷酸酶活性测定在全血细胞减少疾病鉴别诊断中的价值[J].淮海医药，2006，24（6）：487-488
[4] 石青武.中性粒细胞碱性磷酸酶染色在血液病诊断中的应用[J].青海医学院学报，2004，25（3）：213-215
方法：采集215例血液病患者和30名健康人的静脉血制备血涂片，经Kaplow偶氮偶联法进行NAP细胞化学染色，显微镜油镜观察100个成熟中性粒细胞，以五级积分值记录结果。
结果：急性淋巴细胞白血病（ALL）、类白血病反应（LR）、再生障碍性贫血（AA）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、多发性骨髓瘤（MM），真性红细胞增多症（PV）6组疾病NAP积分明显高于对照组（P<0.01）；CLL、恶性组织细胞病（MH）、骨髓增生异常综合征（MDS-RAEBT）、阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）4组疾病NAP积分明显低于上述6组疾病和对照组（P<0.01）；AML NAP积分略低于对照组，但差异无显著性（P>0.05），与ALL比较差异有高度显著性（P<0.01）。
结论：NAP活性测定可支持血液病的鉴别诊断。
关键词：碱性磷酸酶 血液病
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.274
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2013）08-0246-01
碱性磷酸酶主要见于成熟中性粒细胞、网状细胞和吞噬细胞，其他细胞皆为阴性反应。总结我院血液科215例血液病人的中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）活性观察，进行对比分析，以探讨NAP在血液病中鉴别诊断的应用价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料。本组215例血液病均来源于我院血液科2010～2013年经骨髓涂片细胞学分析、病理检查及有关实验室检查并结合临床参照文献[1]确诊病例，其中再生障碍性贫血（AA）47例、骨髓增生异常综合征（MDS-RAEBT）5例、真性红细胞增多症（PV）4例、急性髓细胞白血病（AML）69例、急性淋巴细胞白血病（ALL）50例、恶性组织细胞病（MH）3例、类白血病反应（LR）13例、阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）4例、慢性粒细胞白血病（CML）13例、多发性骨髓瘤（MM）4例、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）3例。健康人群30例为对照组，其中男18例，女12例。患者和健康人群均采集静脉血制备血涂片2张。
1.2 试剂。Kaplow 偶氮偶联法：①固定液：25%甲醛乙醇溶液；②丙二醇缓冲液：0.05 mmol/L 2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇溶液（pH9.75）；③基质孵育液（pH9.4-9.6新鲜配制）：α-磷酸萘酚钠20mg溶于缓冲液20ml，再加入坚牢蓝RR 20mg；④苏木素复染液。细胞染色方法：新鲜血片用固定液冷固定（4～10℃）30s，水洗、晾干后放入基质孵育液（按上述方法新鲜配制）中，37℃温浴30min，流水冲洗，晾干后苏木素复染液复染5min，水洗、 晾干。显微镜油镜观察100个成熟中性粒细胞，按每个细胞浆内颗粒多少分成五级：（-）、（1+）、（2+）、（3+）、（4+），用半定量记分法，以积分值记录结果[2]。
1.3 统计学处理。计量数据以X±S表示，应用SPSS 10.0统计软件，行单因素方差分析，以α=0.05为检验标准。
2 结果
2.1 对照组与血液病患者NAP积分结果对比。AA、LR和ALL等的NAP积分显著高于对照组；MDS-RAEBT、CML、MH、PNH的NAP积分明显低于对照组，其中MH和CML的NAP积分最低；AML的NAP积分略低于对照组，但差异无显著性。
2.2 LSD及S-N-K多重比较结果。AA与PNH的NAP积分差异有高度显著性（t=4.95，P<0.01）；NAP积分在LR与CML组间（t=16.62）、ALL与AML组间（t=15.08）、MH与MM组间（t=4.11）、CLL与CML组间（t=59.34）差异均有高度显著性（P<0.01），这与杨晓春等人的研究结果一致。
3 讨论
NAP是成熟粒细胞S颗粒释放的一种酶，其活力与成熟粒细胞的成熟程度和功能、感染的程度、细菌或病毒的种类有关[2]。在严重细菌感染，LR、AA、ALL、CML急性变，PV、MM等疾病中NAP活性增高；在CML、MH、MDS-RAEBT、DNH、继发性红细胞增多症等疾病中NAP活性减低。
本组资料显示，在215例血液病中各组疾病NAP的活性积分与对照组比较：ALL、LR、AA、MM均明显高于对照组；MDS-RAEBT、CML、MH、PNH均明显低于对照组。而在各组疾病的鉴别诊断，如PNH与AA的鉴别：前者降低，后者显著增高，AA者中性粒细胞越低，贫血越重，NAP则越高。经过观察，AA在缓解时NAP积分有下降趋势，但很难恢复正常。ALL与AML的鉴别中，前者NAP活性增多明显，后者NAP活性正常或略低。CML与LR的鉴别中，前者明显降低，后者明显增高[4]。MH与反应性组织细胞增生症差异有显著性，前者降低，后者增高。
综上所述，NAP的活性对于血液病的鉴别诊断有重要临床价值。
参考文献
[1] 张之南.血液病诊断及疗效标准[M].天津：天津科学技术出版社，1991：1
[2] 陈方平，覃西.血液学检验[M].2版.北京：人民卫生出版社，2003：48-49
[3] 杨晓春.中性粒细胞碱性磷酸酶活性测定在全血细胞减少疾病鉴别诊断中的价值[J].淮海医药，2006，24（6）：487-488
[4] 石青武.中性粒细胞碱性磷酸酶染色在血液病诊断中的应用[J].青海医学院学报，2004，25（3）：213-215