【摘 要】
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为了建立大肠杆菌O157∶H7菌体蛋白的双向电泳技术,获得背景清晰,蛋白点分辨率高,重复性好的双向电泳图谱.对双向电泳技术中的样品制备方法、上样量、染色等关键步骤进行了优
【机 构】
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广西兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西大学生命科学与技术学院,广西大学动物科技学院
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为了建立大肠杆菌O157∶H7菌体蛋白的双向电泳技术,获得背景清晰,蛋白点分辨率高,重复性好的双向电泳图谱.对双向电泳技术中的样品制备方法、上样量、染色等关键步骤进行了优化.最终选用冰浴超声(9 s/间隔9 s,200 w)3min,再置4℃24 h后离心提取蛋白样品,以上样量为0.5 mg菌体蛋白在pH值4-7的24 cm IPG胶条上进行电泳,最后用考马斯亮蓝G-250染色,获得了较好的双向电泳图谱,得到了850士20个蛋白质点,蛋白主要集中在pH值4.06-7.53之间,匹配率为95.3％.随机选取10个蛋白质点进行质谱鉴定,检出率100％,10个蛋白质除了一个蛋白质为假定蛋白以外,其他蛋白质分属于乙酰辅酶A合成、能量代谢、氨基酸代谢等代谢途径.建立的大肠杆菌O157∶H7菌体蛋白双向电泳方法,为开展大肠杆菌O157∶H7强弱毒力菌株的差异蛋白质组学研究奠定了基础.
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