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目的建立一套稳定的绿色荧光蛋白转基因小鼠（C57BL／6-gfp）嗅球神经干细胞（NSC）体外培养的方法，并初步应用于定位注射试验，为干细胞移植治疗神经性耳聋的实验研究奠定基础。方法培养C57BL／6-gfp小鼠胚胎嗅球NSC，传代并进行分化实验，鉴定后将其立体定位注射于大鼠耳蜗核。结果所培养的NSC生长良好，可稳定传代，能够分化为三种神经细胞。定位注射后可在局部见到绿色荧光阳性的细胞团。结论该方法培养的C57BL／6-gfp小鼠胚胎嗅球NSC可稳定传代并可作为荧光标记细胞进行移植试验。