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【中图分类号】R446.5 【文献标识码】C 【文章编号】1550-1868（2015）03
【摘要】目的：探究分析茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑制作用。方法：用革兰氏阴性的铜绿假单胞菌和阳性的金黄色葡萄球菌作为试验菌，通过检测茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌作用前后细菌培养液的可溶性和电导率的变化及细菌体在蛋白质和磷代谢方面的表达变化，初步的表现出茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑菌机理。结果：茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌均有抑制作用，但是对金黄色葡萄球菌的抑制作用更加强。结论：经过茶多酚的处理后，细菌培养液的总糖浓度和电导率都有所增大，说明茶多酚可以破坏细胞膜的结构，可以增加细胞的通透性，使细胞的内容物外泄。此外，经过茶多酚处理后的铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌对磷的消耗量减少，以致影响核酸和磷脂等细胞的合成及能量代谢，通过分析证实了茶多酚可以妨碍细胞蛋白的正常表达，以致影响细胞的结构和酶的催化活性，最后导致了细菌正常功能丧失。
【关键词】茶多酚；铜绿假单胞菌；金黄色葡萄球菌；抑制作用；分析
茶多酚是茶叶多酚类的总称，含有花色苷类、黄烷醇类、酚酸类、黄酮类和黄酮醇类等成分，其中以茶素类的化合物中黄烷醇类的含量较高。茶多酚的抑菌作用较广，对有无细胞壁的革兰氏阳性和阴性细菌都有抑制的作用，如在肉制品可以常见到的致病菌有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均可抑菌的活性。茶多酚是一种常见的天然生物保鲜剂，它的抑菌机理虽然目前还尚不完全的明了，但没有比较的系统关于一些抑菌机理的方面研究报道。因此，通过检测茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌作用前后细菌培养液的可溶性和电导率的变化及细菌体在蛋白质和磷代谢方面的表达变化，初步的表现出茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑菌机理。在较大的系统中考察关于茶多酚对细菌体细胞内分子代谢和细胞膜通透性的影响作用，从而探明茶多酚抑菌的模式和机理，为茶多酚在用于食品的保鲜提供一些基础性理论依据。
1资料与方法
1.1材料 纯化的铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌是由我市的疾病预防控制中心所提供的， 茶多酚是由康九化工的有限公司所提供，营养肉汤、琼脂也是我市的疾病预防控制中心所提供的。
1.2方法 用革兰氏阴性的铜绿假单胞菌和阳性的金黄色葡萄球菌作为试验菌，通过检测茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌作用前后细菌培養液的可溶性和电导率的变化及细菌体在蛋白质和磷代谢方面的表达变化，初步的表现出茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑菌机理。
1.2.1茶多酚抑菌的活性测定：将活化的铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌转接到了营养肉汤例，在37°C的培养液中培养12 h之后离心然后去上清液，然后再用营养的肉汤适当的稀释菌体，获得菌液，最后加入茶多酚，一般情况下在常温下需要孵育10、20、30和40min，，分别取55μL在平板涂布，在37°C倒置培养24 小时，观测菌落的生长情况。
1.2.2菌液的电导率测定：将铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌用0.1mol/L的磷酸为缓冲液洗涤2到3次，菌液的浓度需调到106CFU/mL，取出5 毫升分别加入1g/L、2g/L的茶多酚混合，每隔10 min至15min测一下电导率。
1.2.3菌体的可溶性总糖测定：将铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌5mL与相同体积的茶多酚混合，分别在1、2、5、7、8、10和12小时取出1mL的混合液的离心液，取出上清液之后稀释5倍后取出50μL在离心管中加入200μL的蒽酮试剂，迅速的放在冰浴中冷却5min， 再放在沸水浴精确的煮10min，冷却后在室温下放置10min，分析酶标仪测定620nm处的吸光值情况。
1.2.4菌体的磷代谢测定：将活化的铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌转接到了营养肉汤例，在37°C的培养液中培养12 h之后离心然后去上清液，用0.1mol/L的磷酸为缓冲液稀释细菌体，并得到108CFU/mL菌液，取出5mL的菌液和0.5mL的葡萄糖溶液放入离心管内，并加入200μL的磷标准液和200μL的茶多酚后，分别在1、2、5、7、8、10和12小时吸取的悬浮液0.1mL，分析酶标仪测定620nm处的吸光值情况。
2结果 茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌均有抑菌的作用，并且伴随与细菌的作用时间延长，抑制细菌率也呈增长的趋势。茶多酚对金黄色葡萄球菌更具有明显抑菌的作用。
3 结论 茶多酚结构的基础主要是多酚基以及多环的结构，对生物的大分子如蛋白质、脂类核酸和碳氢化合物具有高度亲和力，导致破坏细菌的细胞膜结构。对两种菌类的磷代谢进行分析，表明茶多酚可以通过来减少细菌对磷代谢的消耗，阻碍磷脂、核酸的合成及影响糖类的代谢。使细的胞能量代谢受到阻碍。茶多酚对金黄色葡萄球菌比铜绿假单胞菌的抑菌作用更强，其主要原因可能是与这两种菌类在细胞壁的结构上有些差异区别。一般的革兰氏阳性菌的细胞壁主要成分为肽聚糖与少量的磷壁酸，对氨基酸、糖类和大部分的离子来讲容易透过，但是革兰氏阴性菌的细胞壁在结构上较为复杂，是由外模和肽聚糖层构成，不是很容易被破坏，并且外膜负电荷比较强，能够控制一些物质随意的进出。目前通过检测茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌作用前后细菌培养液的可溶性和电导率的变化及细菌体在蛋白质和磷代谢方面的表达变化，初步的表现出茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑菌机理。在较大的系统中考察关于茶多酚对细菌体细胞内分子代谢和细胞膜通透性的影响作用，从而探明茶多酚抑菌的模式和机理，为茶多酚在用于食品的保鲜提供一些基础性理论依据。
参考文献
[1]曾亮，黄建安，李赤翎，等.儿茶素的抑菌效果及机理研究[J].食品工业科技， 2009， 30（5）： 89 92.
[2] MT 马迪根，JM 马丁克.微生物生物学（第11版）[M]..李明春译. 北京： 科学出版社， 2009： 95-113.
[3] 董丽华，杨鹏春，戴迟兵.茶多酚对人结肠癌细胞株 Caco-2细胞凋亡及细胞周期的影响[J].广东医学，2015，01：50-52.
[4] 姚远，董庆利，胡孟晗.叶维乳酸钠、茶多酚与壳聚糖协同抑制铜绿假单胞菌的效果[J].生物加工过程，2014，04：60-65.
[5] 陈向东.对天然生物保鲜剂抑菌机理的研究值得更多的关注和重视[J].微生物学通报，2012，39（07）：1044-1044.
【摘要】目的：探究分析茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑制作用。方法：用革兰氏阴性的铜绿假单胞菌和阳性的金黄色葡萄球菌作为试验菌，通过检测茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌作用前后细菌培养液的可溶性和电导率的变化及细菌体在蛋白质和磷代谢方面的表达变化，初步的表现出茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑菌机理。结果：茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌均有抑制作用，但是对金黄色葡萄球菌的抑制作用更加强。结论：经过茶多酚的处理后，细菌培养液的总糖浓度和电导率都有所增大，说明茶多酚可以破坏细胞膜的结构，可以增加细胞的通透性，使细胞的内容物外泄。此外，经过茶多酚处理后的铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌对磷的消耗量减少，以致影响核酸和磷脂等细胞的合成及能量代谢，通过分析证实了茶多酚可以妨碍细胞蛋白的正常表达，以致影响细胞的结构和酶的催化活性，最后导致了细菌正常功能丧失。
【关键词】茶多酚；铜绿假单胞菌；金黄色葡萄球菌；抑制作用；分析
茶多酚是茶叶多酚类的总称，含有花色苷类、黄烷醇类、酚酸类、黄酮类和黄酮醇类等成分，其中以茶素类的化合物中黄烷醇类的含量较高。茶多酚的抑菌作用较广，对有无细胞壁的革兰氏阳性和阴性细菌都有抑制的作用，如在肉制品可以常见到的致病菌有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均可抑菌的活性。茶多酚是一种常见的天然生物保鲜剂，它的抑菌机理虽然目前还尚不完全的明了，但没有比较的系统关于一些抑菌机理的方面研究报道。因此，通过检测茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌作用前后细菌培养液的可溶性和电导率的变化及细菌体在蛋白质和磷代谢方面的表达变化，初步的表现出茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑菌机理。在较大的系统中考察关于茶多酚对细菌体细胞内分子代谢和细胞膜通透性的影响作用，从而探明茶多酚抑菌的模式和机理，为茶多酚在用于食品的保鲜提供一些基础性理论依据。
1资料与方法
1.1材料 纯化的铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌是由我市的疾病预防控制中心所提供的， 茶多酚是由康九化工的有限公司所提供，营养肉汤、琼脂也是我市的疾病预防控制中心所提供的。
1.2方法 用革兰氏阴性的铜绿假单胞菌和阳性的金黄色葡萄球菌作为试验菌，通过检测茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌作用前后细菌培養液的可溶性和电导率的变化及细菌体在蛋白质和磷代谢方面的表达变化，初步的表现出茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑菌机理。
1.2.1茶多酚抑菌的活性测定：将活化的铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌转接到了营养肉汤例，在37°C的培养液中培养12 h之后离心然后去上清液，然后再用营养的肉汤适当的稀释菌体，获得菌液，最后加入茶多酚，一般情况下在常温下需要孵育10、20、30和40min，，分别取55μL在平板涂布，在37°C倒置培养24 小时，观测菌落的生长情况。
1.2.2菌液的电导率测定：将铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌用0.1mol/L的磷酸为缓冲液洗涤2到3次，菌液的浓度需调到106CFU/mL，取出5 毫升分别加入1g/L、2g/L的茶多酚混合，每隔10 min至15min测一下电导率。
1.2.3菌体的可溶性总糖测定：将铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌5mL与相同体积的茶多酚混合，分别在1、2、5、7、8、10和12小时取出1mL的混合液的离心液，取出上清液之后稀释5倍后取出50μL在离心管中加入200μL的蒽酮试剂，迅速的放在冰浴中冷却5min， 再放在沸水浴精确的煮10min，冷却后在室温下放置10min，分析酶标仪测定620nm处的吸光值情况。
1.2.4菌体的磷代谢测定：将活化的铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌转接到了营养肉汤例，在37°C的培养液中培养12 h之后离心然后去上清液，用0.1mol/L的磷酸为缓冲液稀释细菌体，并得到108CFU/mL菌液，取出5mL的菌液和0.5mL的葡萄糖溶液放入离心管内，并加入200μL的磷标准液和200μL的茶多酚后，分别在1、2、5、7、8、10和12小时吸取的悬浮液0.1mL，分析酶标仪测定620nm处的吸光值情况。
2结果 茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌均有抑菌的作用，并且伴随与细菌的作用时间延长，抑制细菌率也呈增长的趋势。茶多酚对金黄色葡萄球菌更具有明显抑菌的作用。
3 结论 茶多酚结构的基础主要是多酚基以及多环的结构，对生物的大分子如蛋白质、脂类核酸和碳氢化合物具有高度亲和力，导致破坏细菌的细胞膜结构。对两种菌类的磷代谢进行分析，表明茶多酚可以通过来减少细菌对磷代谢的消耗，阻碍磷脂、核酸的合成及影响糖类的代谢。使细的胞能量代谢受到阻碍。茶多酚对金黄色葡萄球菌比铜绿假单胞菌的抑菌作用更强，其主要原因可能是与这两种菌类在细胞壁的结构上有些差异区别。一般的革兰氏阳性菌的细胞壁主要成分为肽聚糖与少量的磷壁酸，对氨基酸、糖类和大部分的离子来讲容易透过，但是革兰氏阴性菌的细胞壁在结构上较为复杂，是由外模和肽聚糖层构成，不是很容易被破坏，并且外膜负电荷比较强，能够控制一些物质随意的进出。目前通过检测茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌作用前后细菌培养液的可溶性和电导率的变化及细菌体在蛋白质和磷代谢方面的表达变化，初步的表现出茶多酚对铜绿假单胞菌与金黄色葡萄球菌的抑菌机理。在较大的系统中考察关于茶多酚对细菌体细胞内分子代谢和细胞膜通透性的影响作用，从而探明茶多酚抑菌的模式和机理，为茶多酚在用于食品的保鲜提供一些基础性理论依据。
参考文献
[1]曾亮，黄建安，李赤翎，等.儿茶素的抑菌效果及机理研究[J].食品工业科技， 2009， 30（5）： 89 92.
[2] MT 马迪根，JM 马丁克.微生物生物学（第11版）[M]..李明春译. 北京： 科学出版社， 2009： 95-113.
[3] 董丽华，杨鹏春，戴迟兵.茶多酚对人结肠癌细胞株 Caco-2细胞凋亡及细胞周期的影响[J].广东医学，2015，01：50-52.
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[5] 陈向东.对天然生物保鲜剂抑菌机理的研究值得更多的关注和重视[J].微生物学通报，2012，39（07）：1044-1044.