肝细胞癌是世界范围内发病率和致死率最高的癌症类型之一,我国每年约有11万人死于肝癌。肝癌的正确预防和有效治疗是世界性难题。肿瘤微环境是肿瘤细胞和宿主免疫系统相互作用的主要场所。多种免疫细胞通过趋化因子和趋化因子受体之间的相互作用迁移到肿瘤微环境中,这些免疫细胞和趋化因子在肿瘤微环境中发挥的作用对肿瘤的发生发展和治疗结果有重要的影响。最近,肿瘤免疫治疗的研究飞速发展,肿瘤免疫治疗成为人类对抗肿瘤的有效手段,有大量的研究证实,趋化因子及其受体在肿瘤的免疫治疗中发挥了重要作用。与此同时,趋化因子与肝细胞癌免疫治疗相关的研究尚不是十分的深入,临床上并没有行之有效的肝细胞癌的免疫治疗方法。针对这一现象,我们着手使用生物信息学对趋化因子进行筛选,寻找在肝细胞癌的肿瘤微环境发挥作用的趋化因子,构建过表达该趋化因子相关的肿瘤细胞系,在体外和体内进行肿瘤相关指标的检测,并探究其在肿瘤微环境中的免疫调控作用和机制,然后初步进行该趋化因子相关的肝细胞癌干预治疗的实验,最终为其在临床中的应用提供实验数据和理论基础,为肝细胞癌的治疗提供一种新的有效的手段。通过生物信息学分析,我们确定了一种在多种肿瘤类型中的表达均低于其癌旁的趋化因子:CCL14（C-C motif chemokine ligand 14,C-C序列趋化因子配体14）。CCL14是一种CC型趋化因子配体,在多个组织中表达,其在肿瘤组织中的低表达,这提示CCL14可能是一种具有抑癌功能的趋化因子。同时,我们查阅了相关的文献,几乎没有CCL14在肿瘤微环境中发挥功能的报道,因此,对于趋化因子CCL14与肿瘤微环境的研究同时具有可行性和创新性。以此为研究切入点,开展了课题研究。首先,我们构建了多种过表达CCL14的肿瘤细胞系,并在体外的实验验证了过表达CCL14并不会对肿瘤细胞系的生长产生明显影响。然后我们通过皮下荷瘤等形式,在免疫力正常的小鼠体内接种多种CCL14过表达的肿瘤细胞系,发现过表达CCL14成功的抑制了肿瘤的生长,证实了CCL14在免疫力正常小鼠体内的肿瘤微环境中可以发挥抑癌功能。接着,我们在裸鼠体内进行荷瘤实验,观察到在缺乏免疫细胞的肿瘤微环境中,CCL14的过表达并不能发挥其抑癌作用,肿瘤的生长没有发生明显抑制。随后,为了探究CCL14在肝细胞癌中干预治疗的可行性,对免疫力正常小鼠进行肝原位荷瘤,之后通过尾静脉的注射腺相关病毒AAV8的方式将过表达CCL14的DNA片段导入肝细胞中,结果证实CCL14的干预可以对肝细胞癌产生有效的治疗。结合文献回顾和本实验室先前的研究经验,找到了与CCL14关系密切的热点分子EZH2,经过生物信息学分析和实验验证,发现在B16肿瘤细胞系中,EZH2对CCL14的表达起负向调控的作用。在肝细胞癌中,EZH2-CCL14信号轴可能是CCL14发挥抑癌功能的调控方式。在本研究中,我们通过生物信息学分析、慢病毒系统改造肿瘤细胞系、小鼠皮下荷瘤、肝原位荷瘤、尾静脉注射腺相关病毒等实验,发现了CCL14在肿瘤免疫微环境抑制肿瘤生长的功能,同时还探究了CCL14在肿瘤免疫治疗中的临床应用价值。