【摘 要】
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第一部分ITIH5在3T3-L1细胞及各种肥胖模型小鼠脂肪组织中的表达目的:探索ITIH5在C57小鼠各组织中分布情况,检测ITIH5在脂肪组织与脂肪细胞中的表达水平。方法:采用RT-QPCR检测ITIH5在C57（C57BJ/6L）小鼠下丘脑、肝脏、脂肪、肌肉、心脏等组织中的m RNA表达水平,免疫组织化学染色（IHC）检测ITIH5在脂肪细胞中的定位,RT-QPCR和western blot检
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第一部分ITIH5在3T3-L1细胞及各种肥胖模型小鼠脂肪组织中的表达目的:探索ITIH5在C57小鼠各组织中分布情况,检测ITIH5在脂肪组织与脂肪细胞中的表达水平。方法:采用RT-QPCR检测ITIH5在C57（C57BJ/6L）小鼠下丘脑、肝脏、脂肪、肌肉、心脏等组织中的m RNA表达水平,免疫组织化学染色（IHC）检测ITIH5在脂肪细胞中的定位,RT-QPCR和western blot检测ITIH5在C57小鼠、ob/ob小鼠、db/db小鼠脂肪组织中m RNA和蛋白的表达水平,以及3T3-L1细胞诱导分化过程中ITIH5的表达变化。结果:ITIH5在脂肪组织中m RNA表达水平最高,主要定位在脂肪细胞的胞质中;与C57小鼠相比,ITIH5在ob/ob小鼠、db/db小鼠脂肪组织中的m RNA和蛋白水平均显著上调（P＜0.01）;C57高脂饮食喂养组小鼠脂肪组织中ITIH5的m RNA和蛋白表水平较普食组明显上调（P＜0.01）;ITIH5的m RNA和蛋白水平随3T3-L1细胞诱导分化上调（P＜0.01）。结论:ITIH5可能与脂肪细胞分化、脂质累积有关。第二部分ITIH5对3T3-L1细胞分化与脂质积累的影响目的:探索ITIH5对3T3-L1细胞分化、脂质累积以及相关基因的影响。方法:利用ITIH5过表达（Ad-ITIH5）和敲低（Ad-si ITIH5）腺病毒分别感染3T3-L1细胞后进行诱导分化,油红O染色光镜下观察脂质累积的红色变化,油红O比色法进行脂质含量定量检测。RT-QPCR和western blot检测ITIH5、脂肪细胞分化相关基因（CEBPα、PPARγ、FABP4）、脂质累积相关基因（FAS、CD36、Adiponectin）的变化。采用RT-QPCR、ELISA检测炎症相关因子（IL-1β、IL-6、TNFα）的m RNA和蛋白水平。结果:与Ad-GFP组或Ad-si GFP组相比较,Ad-ITIH5组或Ad-si ITIH5组3T3-L1细胞中ITIH5的m RNA和蛋白水平显著上调或下调（P＜0.01）,表明ITIH5在体外过表达或敲低成功。油红O染色结果表明,与Ad-si GFP相比,ITIH5敲低后3T3-L1细胞分化、脂质累积减少（P＜0.01）。同时,Ad-si ITIH5组CEBPα、PPARγ、FABP4、FAS、CD36的m RNA和蛋白水平明显下调（P＜0.01）,Adiponectin无明显变化（P＞0.05）。此外,IL-1β、IL-6、TNFα的m RNA和蛋白水平显著下调（P＜0.05）。在以上实验中,3T3-L1细胞中ITIH5过表达则观察到与敲低组相反的结果。结论:体外实验证明ITIH5敲低通过调控脂肪细胞分化、脂质累积相关基因的表达,减少了3T3-L1细胞的成脂分化,ITIH5过表达则与之相反。第三部分ITIH5对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的影响目的:体内探究ITIH5对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的作用。方法:将8周龄健康雄性C57小鼠随机分为普食组（ND）、高脂组（HFD）,喂养12周后腹股沟脂肪垫原位注射Ad-si GFP或Ad-si ITIH5,一周1次,连续3周。并记录体重、摄食、肛温等指标。注射3周后,测定GTT、ITT、呼吸交换率（RER）等代谢指标。取小鼠腹股沟脂肪（i WAT）称重以及HE染色观察脂肪细胞形态。RT-QPCR、western blot检测ITIH5的m RNA和蛋白水平。结果:与Ad-si GFP组相比较,腹股沟脂肪垫ITIH5敲低后,普食喂养的小鼠之间各项指标均无明显差异。高脂饮食喂养的小鼠表现出体重减轻（P＜0.05）、肛温升高（P＜0.01）,GTT曲线下面积降低（P＜0.05）、ITT曲线下面积降低（P＜0.01）、氧耗增加（P＜0.01）、二氧化碳产生量增加（P＜0.01）以及更高的能量消耗（P＜0.01）,但摄食和呼吸商（RER）无显著差异（P＞0.05）。同时,通过大体组织我们观察到高脂饮食喂养的小鼠ITIH5敲低后i WAT重量减轻（P＜0.01）,H＆E染色结果显示脂肪细胞体积也减小。结论:腹股沟脂肪垫ITIH5敲低可以增加高脂饮食诱导肥胖小鼠的胰岛素敏感性、糖耐量、能量消耗。
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