CD4+CD25+Treg是一类新被认识的调节性T细胞，被认为是机体调节对外来抗原应答、维持免疫系统自稳状态的主要细胞，在维持机体内环境稳定和自身免疫耐受等方面起到重要作用。 CD4+CD25+Treg细胞表型标记包括细胞毒性T淋巴细胞CD152(也称CTLA-4)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子相关蛋白(GITK)，叉头蛋白(FOXP3)。CD152是一种协同刺激分子，表达于活化的T细胞上，CD4+CD25+Treg细胞的功能由CD152介导的信号传递来执行，CD4+CD25+Treg细胞表面的CD152和抗原呈递细胞(APC)表面的CD80／CD86结合，降低活化T细胞的子代细胞对抗原刺激的敏感性，从而诱导Treg抑制作用。阻断CD152的信号传递将阻断Treg细胞的调节作用，因此，目前认为CD152是一种抑制性调节分子，与CD4+CD25+Treg的活化有关。 近年来，许多研究发现早期妊娠孕妇外周血及蜕膜CD4+CD25+Treg细胞均明显升高，而自然流产病人外周血及蜕膜CD4＋CD25＋Treg细胞降低，这提示CD4＋CD25＋Treg在母胎免疫耐受维持中有重要作用，这些CD4＋CD25＋Treg高频率地表达细胞内型CD152，而CD152的表达强度高低与Treg细胞抑制功能强弱相关。关于妊娠期CD4＋CD25＋Treg增殖的调控因素尚未明确。在妊娠期间，胎盘可分泌大量激素参与母体免疫耐受的调节，包括E2、P、HCG以及蜕膜羊膜分泌的前列腺(PGS)等。目前关于妊娠激素对CD4＋CD25＋Treg增殖的作用及其机制的研究很少，有待探索。 控制下超排卵是目前常规体外受精-胚胎移植程序中不可缺少的重要步骤。所谓超排就是在药物的作用下使一个IVF周期中有多个卵泡发育，以便获取较多的卵子，得到较多可供移植的胚胎。在超排中多个卵泡同步发育，使体内激素水平在受孕前就明显升高，据此生殖内分泌变化特点，本文主要研究超排对CD4＋CD25＋Treg细胞及其细胞内表达的CD152的影响，并比较妊娠结局CD4＋CD25＋Treg细胞及CD152水平，较深入探讨下述4个方面：1、未孕状态下体内激素水平升高对CD4＋CD25＋Treg细胞及其细胞内表达的CD152的影响；2、雌二醇(E2)水平与CD4＋CD25＋Treg细胞数量的相关性；3、妊娠时CD4＋CD25＋Treg细胞增殖与活化的相关因素；4、比较不同妊娠结局CD4＋CD25＋Treg细胞及CD152水平，分析CD4＋CD25＋Treg细胞在妊娠耐受中的作用及其机制。 妊娠是一个极为复杂而又受到严密控制的生命现象，关于CD4＋CD25＋Treg细胞在妊娠中作用的研究刚刚起步。本文通过超排及妊娠对CD4＋CD25＋Treg细胞、CD152的影响的研究，为探索IVF-ET期间影响CD4+CD25+Treg细胞增殖的相关因素及CD4+CD25+Treg细胞在妊娠免疫耐受中的作用提供新的思路。 材料和方法 1研究对象 选取2004年3月至2005年6月中山二院生殖免疫门诊及生殖中心、中山一院生殖中心病人。研究组纳入标准：不孕症病人接受超排(COH)辅助生育技术；平时月经规则；三个月内无服用过任何激素，包括避孕药；无自身免疫性疾病；无内科合并症。研究组46例女性不孕病人不孕病因有输卵性不孕，不明原因不孕，多囊卵巢，巧克力囊肿，依不同妊娠结局分为未妊娠组、生化妊娠组、临床妊娠组。超排方法：GnRH-a长方案。 对照组纳入标准：健康生育年龄女性；平时月经规则；三个月内无服用过任何激素。 2样本采集 抽取受试者外周静脉血3ml，肝素抗凝。 3样本采集时间 CD4+CD25+Treg、CD152检测采血时间为：对照组卵泡期(月经第1至5天)；研究组未妊娠者①卵泡期(月经第1至5天)，②COH后HCG日；生化妊娠组①卵泡期(月经第1至5天)，②COH后HCG日，③ET后14-16天(早早孕试验阳性)；临床妊娠组①卵泡期(月经第1至5天)，②COH后HCG日，③ET后5周(B超证实为怀孕)。雌二醇检测采血时间：所有研究对象均为HCG日。 4研究方法 使用流式细胞仪(FACS S Lalibnr，Becton Dickinson产品)，采用流式细胞术(FCM)，数据经Cell Quest软件分析，每份样本检测3×104<’4>个细胞，计算CD4＋、CD4＋CD25＋、CD4＋CD25＋CD152细胞的百分数。 5统计学方法 用SPSS10.0FOR WINDOWS进行数据统计分析处理。计量资料行统计描述；平均数分析(Means过程)；两独立样本均数比较行t检验(Independent-Samples TTest过程)；方差分析；直线回归分析。采用Microsoft Excel软件进行作图。平均数和标准差表达为x±s。 结果 1 一般情况比较 研究组平均年龄为29.36±3.12岁，最小年龄为26岁，最大年龄为35岁。研究组未妊娠者平均年龄为28.74±4.32岁，最小年龄为25岁，最大年龄为37岁。研究组生化妊娠者平均年龄为30.12±3.55岁，最小年龄为23岁，最大年龄为36岁。研究组临床妊娠者平均年龄为30.89±4.22岁，最小年龄为25岁，最大年龄为35岁。对照组平均年龄31.00±4.98岁，最小年龄24岁，最大年龄36岁，各组比较差异无统计学意义，见表Ⅰ。 2比较对照组卵泡期、研究组卵泡期及研究组HCG日外周血CD4+CD25+／CD4+百分数检测对照组卵泡期、研究组卵泡期及COH后HCG日外周血CD4+CD25+／CD4+百分数的平均数为6.811±0.246、6.727±0.527、6.842±0.600，见表Ⅱ。对照组与研究组的卵泡期CD4+CD25+／CD4+百分数比较，P<*>=0.458>0.05，其差异无统计学意义。研究组卵泡期与研究组HCG日CD4+CD25+／CD4+百分数比较，P<**>=0.808>0.05，其差异亦无统计学意义。对照组卵泡期与研究组HCG相比，P=0.808>0.05，其差异仍无统计学意义。本研究表明三者外周血CD4+CD25+／CD4+无差异。 3比较对照组卵泡期、研究组卵泡期及HCG日CD4+CD25+CD152／CD4+CD25+百分数检测对照组卵泡期CD4+CD25+CDl52／CD4+CD25+、研究组卵泡期CD4+CD25+CDl52／CD4+CD25+研究HCG日CD4+CD25+CDl52／CD4+CD25+，百分比平均数分别为92.5±7.84、91.77±2.57、91.82±2.52，见表Ⅲ。对照组与研究组卵泡期CD4+CD25+CDl52／CD4+CD25+百分数之间相比较，P<*>=0.294>0.05二者差异无统计学意义，研究组卵泡期与HCG日比较，P<**>=0.949>0.05，二者差异无统计学意义，三者相比，P=0.478>0.05，差异无统计学意义。 4比较研究组不同妊娠结局CD4+CD25+／CD4+百分比未妊娠组、生化妊娠组、临床妊娠组，测得CD4+CD25+／CD4+百分比平均数分别为7.084±0.48、9.04±0.953、0.71±0.51见表Ⅳ，未妊娠组与生化妊娠组相比P=0.2067>0.05差异无统计学意义。临床妊娠组与生化妊娠组相比较P=0.000<0.05，其差异有统计学意义。临床妊娠组CD4+CD25+／CD4+的百分数明显升高。 5 E2与CD4+CD25+／CD4+回归关系 将检测得到的E2与CD4+CD25+／CD4+之间作回归关系分析，结果：复相关系R=0.300，确定系数R2=0.090，模型的方差分析F=2.367，P=0.137>0.05，说明E2与CD4+CD25+／CD4+之间并无直线回归关系。 6检测研究组生化妊娠与临床妊娠直线同归关系CD4+CD25+／CD4+ 将所测生化妊娠与临床妊娠的CD4+CD25+／CD4+作回归关系分析，结果：复相关系数R=0.871，R2=0.758，SE=0.573，F=43.838，P=0.000<0.05，回归方程为y=5.044+1.7x，说明二者之间存在直线回归关系。 结论 1、超排中多个卵泡同步发育所致的高雌孕激素水不能刺激CD4+CD25+Treg细胞的增殖及CD152表达。 2、不受孕情况下，雌二醇的高低与CD4+CD25+Treg细胞无相关关系。 3、成功妊娠者CD4+CD25+Treg细胞及CD152上升，有统计学意义，妊娠能刺激CD4+CD25+Treg的增殖及增加其活性。 4、妊娠早期外周血CD4+CD25+Treg细胞数量高低与妊娠结局好坏有相关关系，CD4+CD25+Treg细胞在妊娠免疫耐受中有重要作用。