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本文对吉林省西部药用菌物资源进行了调查,并且对生长在该地区特有种蒙古黄榆上的粗毛纤孔菌进行了化学成分和药理作用研究。对吉林省西部地区药用菌物进行资源调查发现了31科、57属的103种菌物,其中药用菌51种,食用菌26种,食药两用菌11种,有毒菌14种,具有其他经济价值的真菌1种,具有开发潜力较大的药用菌51种。
在野外调查发现不同时间采集到的粗毛纤孔菌子实体形态不同,8月中下旬到9月初出现的子实体菌蕾,呈金黄色,水分足,质软;9月中下旬子实体成熟,则呈黄棕色,质韧;9月末以后子实体老化,呈黑褐色,质硬。故对三个不同时期粗毛纤孔菌子实体进行对比分析。
化学方面,本文选取三个不同发育时期粗毛纤孔菌子实体作为原材料,对其化学成分异同进行了研究。研究共分为两部分,第一部分为GC-MS方法检测,实验采用石油醚(60-90℃)、二氯甲烷、丙酮、甲醇和蒸馏水进行梯度提取,分别回流提取3次,每次提取8h后兼并提取液,利用旋转蒸发仪减压回流浓缩提取液得到新提取液,加上三种时期粗毛纤孔菌子实体,共计18个样品。结果表明,菌蕾子实体、成熟子实体和老化子实体具有共性成分,如乙基苯、正己醇、苯甲醛、顺式-3-正丁基-2-乙基四氢噻吩、2,6,10-三甲基十二烷、2,6,11,15-四甲基十六烷和2,6,10-三甲基十四烷,同时也具有许多非共性成分。对三个不同发育时期子实体及其石油醚提取物、二氯甲烷提取物、丙酮提取物、甲醇提取物和水提取物中含量最高的化合物分别为:菌蕾子实体中分别为亚油酸甲酯、亚油酸、1-羟基环己基苯基甲酮、1,3,5,7,9,13-六甲基-11,15-二苯基-2,4,6,8,10,12,14,16,17,18,19,20-十二烷氧基-1,3,5,7,9,11,13,15-八硅五环[9.5.1.13,9.15,15.17,13]二十烷、油酸甲酯、2-萘-2-基丙烷-1,2-二醇;成熟子实体中分别为2,5-二甲基苯甲醛、亚油酸、二甲基癸氧基十六烷氧基硅烷、二十七烷、DL-阿拉伯糖醇、3[(2,3,4,9四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)甲基]环己烯-1-酮;老化子实体分别为顺式-3-正丁基-2-乙基四氢噻吩、二甲基(二十二碳氧基)丁氧基硅烷、二甲基癸氧基十六烷氧基硅烷、对苯二甲酸二(2-乙基己基)酯、2-甲基丙炔酸、3-甲基-3-辛醇。第二部分是采用HPLC-MS方法对三种时期子实体水提物化学成分进行对比分析,结果表明,三个不同发育时期粗毛纤孔菌子实体水提物的HPLC-MS图谱中出现5个共有峰,经鉴定为松柏醛、(Z)-乙酸-3-己醇乙酸酯、三棱酸、二羟基硬脂酸和黄葵内酯;各自也有特征峰,且老化子实体水提物的图谱中出现的化合物数最多。
药理作用方面,以不同发育时期的粗毛纤孔菌子实体粉末灌胃急性肾损伤模型小鼠,给药21d后对其各组肾脏和睾丸进行宏观观察,发现粗毛纤孔菌老化子实体高剂量组(1200mg/kg)小鼠的受损肾脏和睾丸均已恢复正常,并对其进行HE、MASSON染色病理学检查,由病理切片可以发现粗毛纤孔菌老化子实体给药组的小鼠受损肾小球、肾小管结构逐渐恢复,且高剂量组(1200mg/kg)对小鼠受损肾脏和睾丸的恢复作用最强,效果最好;对供试小鼠血清进行促卵泡素(FSH)、促黄体激素(LH)、尿素氮(BUN)、小鼠肌酐(CR)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、小鼠睾酮(T)和酸性磷酸酶(ACP)含量测定,监测数据表明,粗毛纤孔菌老化子实体高剂量(1200mg/kg)组急性肾损伤小鼠血清中FSH、LH、BUN、CR、LDH、SDH和T含量显著降低,ACP含量极显著降低;对小鼠肾脏和睾丸进行蛋白激酶B(AKT)和应激活化蛋白激酶(JNK)通路蛋白表达量检测,采用WesternBlot法检测AKT蛋白和JNK蛋白在肾脏和睾丸的表达,结果同样表明,粗毛纤孔菌老化子实体高剂量组(1200mg/kg)对AKT和JNK蛋白磷酸化后表达量均显著降低,修复作用显著,其修复机制可能与AKT蛋白和JNK蛋白的表达有关,对其具体的活性物质基础和作用机制还需要深入研究。结果表明粗毛纤孔菌老化子实体对小鼠急性肾、睾丸损伤修复作用显著,菌蕾和成熟期子实体修复作用较弱。
安全性评价方面,以不同发育时期的粗毛纤孔菌子实体粉末及其水提物灌胃小鼠,未出现中毒或死亡情况,故无LD50值。测得子实体粉末及其水提物的最大耐受量分别是6000mg/kg和3000mg/kg,以0.04mL/g体积的最大耐受量灌胃小鼠。实验期间各组小鼠均正常饮食饮水,活泼好动,无中毒等任何异常情况,小鼠体重持续稳定上涨,对各组雄性小鼠进行脏器指数检测,数据表明各给药组脏器指数与空白组均无显著或极显著差异;对各组小鼠进行饮食饮水指数检测,结果表明各给药组小鼠饮食饮水指数与空白组均无显著或极显著差异。对各组小鼠进行脏器的宏观观察,各组小鼠脏器均未出现病变。根据化学药物急性毒性试验技术指导原则中固定计量法的试验结果评价,三种不同发育时期粗毛纤孔菌子实体及其水提物无严重急性中毒的危险性。
总之,本文通过化学成分和修复急性肾损伤药理作用研究表明,老化期为子实体的最佳采收期。
在野外调查发现不同时间采集到的粗毛纤孔菌子实体形态不同,8月中下旬到9月初出现的子实体菌蕾,呈金黄色,水分足,质软;9月中下旬子实体成熟,则呈黄棕色,质韧;9月末以后子实体老化,呈黑褐色,质硬。故对三个不同时期粗毛纤孔菌子实体进行对比分析。
化学方面,本文选取三个不同发育时期粗毛纤孔菌子实体作为原材料,对其化学成分异同进行了研究。研究共分为两部分,第一部分为GC-MS方法检测,实验采用石油醚(60-90℃)、二氯甲烷、丙酮、甲醇和蒸馏水进行梯度提取,分别回流提取3次,每次提取8h后兼并提取液,利用旋转蒸发仪减压回流浓缩提取液得到新提取液,加上三种时期粗毛纤孔菌子实体,共计18个样品。结果表明,菌蕾子实体、成熟子实体和老化子实体具有共性成分,如乙基苯、正己醇、苯甲醛、顺式-3-正丁基-2-乙基四氢噻吩、2,6,10-三甲基十二烷、2,6,11,15-四甲基十六烷和2,6,10-三甲基十四烷,同时也具有许多非共性成分。对三个不同发育时期子实体及其石油醚提取物、二氯甲烷提取物、丙酮提取物、甲醇提取物和水提取物中含量最高的化合物分别为:菌蕾子实体中分别为亚油酸甲酯、亚油酸、1-羟基环己基苯基甲酮、1,3,5,7,9,13-六甲基-11,15-二苯基-2,4,6,8,10,12,14,16,17,18,19,20-十二烷氧基-1,3,5,7,9,11,13,15-八硅五环[9.5.1.13,9.15,15.17,13]二十烷、油酸甲酯、2-萘-2-基丙烷-1,2-二醇;成熟子实体中分别为2,5-二甲基苯甲醛、亚油酸、二甲基癸氧基十六烷氧基硅烷、二十七烷、DL-阿拉伯糖醇、3[(2,3,4,9四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)甲基]环己烯-1-酮;老化子实体分别为顺式-3-正丁基-2-乙基四氢噻吩、二甲基(二十二碳氧基)丁氧基硅烷、二甲基癸氧基十六烷氧基硅烷、对苯二甲酸二(2-乙基己基)酯、2-甲基丙炔酸、3-甲基-3-辛醇。第二部分是采用HPLC-MS方法对三种时期子实体水提物化学成分进行对比分析,结果表明,三个不同发育时期粗毛纤孔菌子实体水提物的HPLC-MS图谱中出现5个共有峰,经鉴定为松柏醛、(Z)-乙酸-3-己醇乙酸酯、三棱酸、二羟基硬脂酸和黄葵内酯;各自也有特征峰,且老化子实体水提物的图谱中出现的化合物数最多。
药理作用方面,以不同发育时期的粗毛纤孔菌子实体粉末灌胃急性肾损伤模型小鼠,给药21d后对其各组肾脏和睾丸进行宏观观察,发现粗毛纤孔菌老化子实体高剂量组(1200mg/kg)小鼠的受损肾脏和睾丸均已恢复正常,并对其进行HE、MASSON染色病理学检查,由病理切片可以发现粗毛纤孔菌老化子实体给药组的小鼠受损肾小球、肾小管结构逐渐恢复,且高剂量组(1200mg/kg)对小鼠受损肾脏和睾丸的恢复作用最强,效果最好;对供试小鼠血清进行促卵泡素(FSH)、促黄体激素(LH)、尿素氮(BUN)、小鼠肌酐(CR)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、小鼠睾酮(T)和酸性磷酸酶(ACP)含量测定,监测数据表明,粗毛纤孔菌老化子实体高剂量(1200mg/kg)组急性肾损伤小鼠血清中FSH、LH、BUN、CR、LDH、SDH和T含量显著降低,ACP含量极显著降低;对小鼠肾脏和睾丸进行蛋白激酶B(AKT)和应激活化蛋白激酶(JNK)通路蛋白表达量检测,采用WesternBlot法检测AKT蛋白和JNK蛋白在肾脏和睾丸的表达,结果同样表明,粗毛纤孔菌老化子实体高剂量组(1200mg/kg)对AKT和JNK蛋白磷酸化后表达量均显著降低,修复作用显著,其修复机制可能与AKT蛋白和JNK蛋白的表达有关,对其具体的活性物质基础和作用机制还需要深入研究。结果表明粗毛纤孔菌老化子实体对小鼠急性肾、睾丸损伤修复作用显著,菌蕾和成熟期子实体修复作用较弱。
安全性评价方面,以不同发育时期的粗毛纤孔菌子实体粉末及其水提物灌胃小鼠,未出现中毒或死亡情况,故无LD50值。测得子实体粉末及其水提物的最大耐受量分别是6000mg/kg和3000mg/kg,以0.04mL/g体积的最大耐受量灌胃小鼠。实验期间各组小鼠均正常饮食饮水,活泼好动,无中毒等任何异常情况,小鼠体重持续稳定上涨,对各组雄性小鼠进行脏器指数检测,数据表明各给药组脏器指数与空白组均无显著或极显著差异;对各组小鼠进行饮食饮水指数检测,结果表明各给药组小鼠饮食饮水指数与空白组均无显著或极显著差异。对各组小鼠进行脏器的宏观观察,各组小鼠脏器均未出现病变。根据化学药物急性毒性试验技术指导原则中固定计量法的试验结果评价,三种不同发育时期粗毛纤孔菌子实体及其水提物无严重急性中毒的危险性。
总之,本文通过化学成分和修复急性肾损伤药理作用研究表明,老化期为子实体的最佳采收期。