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粗毛栓菌(也被称为硬毛粗盖孔菌)Trametestrogii(Berk.)Bondartsev&Singer(=Funaliatrogii(Berk.)Bondartsev&Singer),隶属于担子菌门Basidiomycota,蘑菇纲Agaricomycetes,多孔菌目Polyporales,多孔菌科Polyporaceae,栓菌属Trametes。其不仅含有多种化学成分,还有抗肿瘤,增强免疫的功效。本文通过查阅大量文献,在团队前期研究基础上首先对粗毛栓菌菌种进行中试固体发酵,并与粗毛栓菌子实体的增强免疫与抗氧化活性进行对比;对粗毛栓菌复方饲料添加剂进行安全性评价实验;通过紫外-分光光度法测定,测定了粗毛栓菌复方饲料添加剂中多糖、总黄酮含量,采用试剂盒检测了黄曲霉素的含量;研究了粗毛栓菌复方饲料添加剂对西门塔尔公牛的体重及生化指标的影响。具体内容如下:
综述部分,通过查阅国内外文献资料,对中药及菌物药在饲料添加剂中的应用研究进展进行了整理、分析和综述,并提出了存在的科学问题和建议。
粗毛栓菌中试固体发酵研究:首先对粗毛栓菌菌种进行了分子鉴定,确定所用实验菌种为粗毛栓菌;对菌种进行扩繁,按比例配制1000余袋发酵袋料后,接种,经28天获得中试级粗毛栓菌固体发酵物。
粗毛栓菌子实体与发酵物的增强免疫及抗氧化活性对比:采用小鼠体内实验法对粗毛栓菌子实体与发酵产物的增强免疫和抗氧化活性进行研究,结果表明粗毛栓菌子实体不同极性提取物和固体发酵物水提取物均能明显促进免疫器官指数的增长,能显著提高免疫细胞因子白介素4(IL-4)、白介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)和免疫球蛋白A(IgA)的含量。子实体水提物高、中剂量组,发酵物高、低剂量组还能增强小鼠血清溶血素含量,但两种提取物无显著差异。通过HE及免疫组化切片观察,结果显示子实体水提取物高剂量组和发酵物水提取物高剂量小鼠的胸腺、脾脏细胞数量显著高于空白组和模型组,细胞形态完整。子实体提取物和发酵物均能降低MDA的含量,使T-AOC、SOD的含量显著上升。肝脏细胞中,模型组肝细胞间液较多,细胞零散分布。而给药组细胞数量较多,尤其发酵物水提取物高剂量组细胞分布均匀,细胞核较大且完整。以上实验结果证明,粗毛栓菌子实体和固体发酵物的水提取物均能更好地改善小鼠的免疫能力和抗氧化活性,但两种水提取物无明显差异。
粗毛栓菌复方饲料添加剂的配伍及安全性评价研究:首先在团队前期研究基础和中医药理论指导下对粗毛栓菌复方饲料添加剂的处方进行优化,最终确定其处方为粗毛栓菌固体发酵物∶黄芪∶甘草=(2∶1∶1);随后利用该复方添加剂进行小鼠急性毒性试验,连续观察10天,小鼠行为活动正常,无死亡;经过30天的蓄积毒性试验,结果显示小鼠的器官指数无显著性变化,肝、肾功能生化指标与空白组相比无明显改变,各器官HE切片均无病变。实验结果证明粗毛栓菌复方饲料添加剂大剂量或长期使用均不能造成小鼠脏器损伤,为无毒性。
粗毛栓菌复方饲料添加剂的成分含量测定:通过对粗毛栓菌复方饲料添加剂中粗多糖、总黄酮及黄曲霉素含量测定,确定了该添加剂中粗多糖含量为12.5%;乙醇提取物和水提取物的总黄酮含量分别为5.95%和1.01%;粗毛栓菌的子实体、固体发酵物和制得的饲料添加剂中黄曲霉素含量分别为0μg/kg、0μg/kg和0.09~0.22μg/kg。本研究为粗毛栓菌复方饲料添加剂增强动物机体免疫功能的药理活性机制的研究进行了初步的探索,也为该添加剂质量标准建立提供佐证。
粗毛栓菌复方饲料添加剂对牛的体重和生化指标的影响:在西门塔尔公牛的日粮按比例加入粗毛栓菌复方饲料添加剂后,试验组牛的体重明显提高,血液生化指标UREA、TCHE、TG均有所降低,GLU和TP含量显著提高;对IgA、IgG、IFN-γ、IL-2、IL-4五个免疫指标进行检测,结果与空白组相比均有不同程度的提高;试验牛的日增重比空白组增长了52.97%,饲料转化率比空白组提高了34.59%,而且3%剂量组的料重比最低,经济效益最好。因此,在使用该饲料添加剂时比例不宜过高,添加量应控制在3%左右为宜。
结论,粗毛栓菌子实体水提取物及发酵产物均可改善小鼠免疫能力,提高抗氧化能力,但固体发酵物作用优于子实体各提取物;粗毛栓菌复方饲料添加剂能显著增加西门塔尔公牛体重,提高免疫力,为体外探索粗毛栓菌复方饲料添加剂免疫增强机制提供借鉴。
综述部分,通过查阅国内外文献资料,对中药及菌物药在饲料添加剂中的应用研究进展进行了整理、分析和综述,并提出了存在的科学问题和建议。
粗毛栓菌中试固体发酵研究:首先对粗毛栓菌菌种进行了分子鉴定,确定所用实验菌种为粗毛栓菌;对菌种进行扩繁,按比例配制1000余袋发酵袋料后,接种,经28天获得中试级粗毛栓菌固体发酵物。
粗毛栓菌子实体与发酵物的增强免疫及抗氧化活性对比:采用小鼠体内实验法对粗毛栓菌子实体与发酵产物的增强免疫和抗氧化活性进行研究,结果表明粗毛栓菌子实体不同极性提取物和固体发酵物水提取物均能明显促进免疫器官指数的增长,能显著提高免疫细胞因子白介素4(IL-4)、白介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)和免疫球蛋白A(IgA)的含量。子实体水提物高、中剂量组,发酵物高、低剂量组还能增强小鼠血清溶血素含量,但两种提取物无显著差异。通过HE及免疫组化切片观察,结果显示子实体水提取物高剂量组和发酵物水提取物高剂量小鼠的胸腺、脾脏细胞数量显著高于空白组和模型组,细胞形态完整。子实体提取物和发酵物均能降低MDA的含量,使T-AOC、SOD的含量显著上升。肝脏细胞中,模型组肝细胞间液较多,细胞零散分布。而给药组细胞数量较多,尤其发酵物水提取物高剂量组细胞分布均匀,细胞核较大且完整。以上实验结果证明,粗毛栓菌子实体和固体发酵物的水提取物均能更好地改善小鼠的免疫能力和抗氧化活性,但两种水提取物无明显差异。
粗毛栓菌复方饲料添加剂的配伍及安全性评价研究:首先在团队前期研究基础和中医药理论指导下对粗毛栓菌复方饲料添加剂的处方进行优化,最终确定其处方为粗毛栓菌固体发酵物∶黄芪∶甘草=(2∶1∶1);随后利用该复方添加剂进行小鼠急性毒性试验,连续观察10天,小鼠行为活动正常,无死亡;经过30天的蓄积毒性试验,结果显示小鼠的器官指数无显著性变化,肝、肾功能生化指标与空白组相比无明显改变,各器官HE切片均无病变。实验结果证明粗毛栓菌复方饲料添加剂大剂量或长期使用均不能造成小鼠脏器损伤,为无毒性。
粗毛栓菌复方饲料添加剂的成分含量测定:通过对粗毛栓菌复方饲料添加剂中粗多糖、总黄酮及黄曲霉素含量测定,确定了该添加剂中粗多糖含量为12.5%;乙醇提取物和水提取物的总黄酮含量分别为5.95%和1.01%;粗毛栓菌的子实体、固体发酵物和制得的饲料添加剂中黄曲霉素含量分别为0μg/kg、0μg/kg和0.09~0.22μg/kg。本研究为粗毛栓菌复方饲料添加剂增强动物机体免疫功能的药理活性机制的研究进行了初步的探索,也为该添加剂质量标准建立提供佐证。
粗毛栓菌复方饲料添加剂对牛的体重和生化指标的影响:在西门塔尔公牛的日粮按比例加入粗毛栓菌复方饲料添加剂后,试验组牛的体重明显提高,血液生化指标UREA、TCHE、TG均有所降低,GLU和TP含量显著提高;对IgA、IgG、IFN-γ、IL-2、IL-4五个免疫指标进行检测,结果与空白组相比均有不同程度的提高;试验牛的日增重比空白组增长了52.97%,饲料转化率比空白组提高了34.59%,而且3%剂量组的料重比最低,经济效益最好。因此,在使用该饲料添加剂时比例不宜过高,添加量应控制在3%左右为宜。
结论,粗毛栓菌子实体水提取物及发酵产物均可改善小鼠免疫能力,提高抗氧化能力,但固体发酵物作用优于子实体各提取物;粗毛栓菌复方饲料添加剂能显著增加西门塔尔公牛体重,提高免疫力,为体外探索粗毛栓菌复方饲料添加剂免疫增强机制提供借鉴。