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人参内生多黏类芽孢杆菌是具有广谱的生物防治作用。因此,通过人参发根与多黏类芽孢杆菌互作研究,从而提高多黏类芽孢杆菌数量、生理特性及抑菌活性,对提高其生防作用具有重要意义。因此本研究,首先,以多黏类芽孢杆菌芽孢数、活菌数、生物膜为评价指标,探究人参发根与多黏类芽孢杆菌互作对菌株生理特性的影响;其次,应用滤纸片扩散方法,探究人参发根与多黏类芽孢杆菌互作对菌株抑菌活性的影响;再次,分离多黏类芽孢杆菌抑菌蛋白部位;并对该蛋白部位进行了热稳定性、pH稳定性、紫外线稳定性评价;应用SDS-PAGE技术,筛选人参发根与多黏类芽孢杆菌互作前后多黏类芽孢杆菌差异表达蛋白的种类;最后,通过高通量转录组测序技术,分析人参发根与多黏类芽孢杆菌互作对菌株基因表达的影响,筛选出人参发根与多黏类芽孢杆菌互作促进菌株抑菌活性提高的通路及关键基因。结果如下:
1.人参发根与多黏类芽孢杆菌互作对多黏类芽孢杆菌生理指标的影响显著(P<0.05)。共培组多黏类芽孢杆菌的芽孢数、活菌数分别为单独培养菌株的8.6倍和2.1倍(P<0.05)。共培组多黏类芽孢杆菌培养基中形成的生物膜更明显。
2.人参发根与多黏类芽孢杆菌互作显著提高了多黏类芽孢杆菌抑菌活性(P<0.05)。当人参发根用量分别为1.0g,3.0g,6.0g,12.0g,15.0g时,多黏类芽孢杆菌的抑菌率分别提高了2.96%,10.46%,18.94%,7.04%,3.50%。优化出人参发根与多黏类芽孢杆菌互作促进抑菌蛋白产生的培养条件:当培养温度为24℃,接种量为0.5%,培养时间为60h时,多黏类芽孢杆菌抑菌活性最强。
3.多黏类芽孢杆菌抑菌蛋白在浓度为60%饱和硫酸铵提取部位;人参发根与多黏类芽孢杆菌互作前后多黏类芽孢杆菌出现4种差异表达抑菌蛋白,分子量分别为15kD、25kD、40kD,45kD;该抑菌粗蛋白有很好的热稳定性、pH稳定性、抗紫外线稳定性。
4.人参发根与多黏类芽孢杆菌互作显著调控了多黏类芽孢杆菌1478个基因表达水平,其中显著上调的基因745个,且有502个差异基因注释到KEGG中121个代谢途径。经富集分析,显著富集的有26个通路。发现与抑菌蛋白相关的一些假定蛋白质和草酸盐脱羧酶等基因均出现了显著上调,最后筛选到了基因lplA(PPYC2-RS09760 )、lplC(PPYC2-RS09760)、oxdD(PPYC2-RS12250),这些基因的上调是人参发根与多黏类芽孢杆菌互作促进抑菌活性提高的原因。
1.人参发根与多黏类芽孢杆菌互作对多黏类芽孢杆菌生理指标的影响显著(P<0.05)。共培组多黏类芽孢杆菌的芽孢数、活菌数分别为单独培养菌株的8.6倍和2.1倍(P<0.05)。共培组多黏类芽孢杆菌培养基中形成的生物膜更明显。
2.人参发根与多黏类芽孢杆菌互作显著提高了多黏类芽孢杆菌抑菌活性(P<0.05)。当人参发根用量分别为1.0g,3.0g,6.0g,12.0g,15.0g时,多黏类芽孢杆菌的抑菌率分别提高了2.96%,10.46%,18.94%,7.04%,3.50%。优化出人参发根与多黏类芽孢杆菌互作促进抑菌蛋白产生的培养条件:当培养温度为24℃,接种量为0.5%,培养时间为60h时,多黏类芽孢杆菌抑菌活性最强。
3.多黏类芽孢杆菌抑菌蛋白在浓度为60%饱和硫酸铵提取部位;人参发根与多黏类芽孢杆菌互作前后多黏类芽孢杆菌出现4种差异表达抑菌蛋白,分子量分别为15kD、25kD、40kD,45kD;该抑菌粗蛋白有很好的热稳定性、pH稳定性、抗紫外线稳定性。
4.人参发根与多黏类芽孢杆菌互作显著调控了多黏类芽孢杆菌1478个基因表达水平,其中显著上调的基因745个,且有502个差异基因注释到KEGG中121个代谢途径。经富集分析,显著富集的有26个通路。发现与抑菌蛋白相关的一些假定蛋白质和草酸盐脱羧酶等基因均出现了显著上调,最后筛选到了基因lplA(PPYC2-RS09760 )、lplC(PPYC2-RS09760)、oxdD(PPYC2-RS12250),这些基因的上调是人参发根与多黏类芽孢杆菌互作促进抑菌活性提高的原因。