【摘 要】
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该研究以MDV gI为研究对象,以鸡痘病毒(FPV)中国株为载体,构建表达MDV gI基因的重组鸡痘病毒(rFPV),在构建成功表达MDV gI的rFPV的基础上,进一步分析rFPV-gI的稳定性及鸡对rF
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该研究以MDV gI为研究对象,以鸡痘病毒(FPV)中国株为载体,构建表达MDV gI基因的重组鸡痘病毒(rFPV),在构建成功表达MDV gI的rFPV的基础上,进一步分析rFPV-gI的稳定性及鸡对rFPV-gI的抗体反应性,然后研究它的免疫保护效力,为研制rFPV-MDV-gI基因工程疫苗,进一步开发多价MDV基因工程重组疫苗奠定基础.根据MDV 648A株病毒基因组gI基因序列,我们设计了两个引物,用PCR扩增出MDV gI基因.通过琼脂糖凝胶电泳,获得一条1060 bp DNA条带,与MDV gI基因的大小是一致.在此基础上,用Qiagen公司胶回收试剂盒来纯化PCR产物.结果显示,rFPV感染的CEF有很强的荧光,而FPV(wt)感染的CEF没有荧光.说明MDV gI得到表达,此表达MDV gI基因rFPV命名为rFPV-MDV 648gI.用rFPV-MDV648gI感染CEF,传代20次后,此rFPV仍然能够在CEF上稳定复制.用10<4>PFU rFPV-MDV648gI及FPV(wt)分别接种1日龄SFP鸡,饲养于带正压过滤空气隔离器中,接种前及接种后20天采血收集血清,用间接免疫荧光法(IFA)分析血清与感染MDV的CEF反应情况.结果表明接种FPV-MDV648gI后鸡血清中含有抗gI抗体.此结果表明表达MDVgI基因的rFPV有一定程度的抗超强毒株免疫保护力.该研究是国内外首次报导构建表达MDV gI基因重组FPV,首次证实rFPV-MDVgI具有一定程度的抗超强毒株免疫保护力.
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