【摘 要】
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目的:运用网络药理学方法探讨身痛逐瘀汤治疗腰椎间盘突出症（LDH）的作用机制,并通过实验研究为身痛逐瘀汤治疗LDH相关作用机制提供科学依据。方法:1、利用TCMSP数据库、化学专业数据库获取身痛逐瘀汤中各味中药的相关化学成分,于SwissTargetPrediction平台实现活性成分靶点预测;分别于GeneCards、OMIM、DisGeNET数据库检索LDH疾病靶点,汇总去除重复值获得疾病LD
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目的:运用网络药理学方法探讨身痛逐瘀汤治疗腰椎间盘突出症（LDH）的作用机制,并通过实验研究为身痛逐瘀汤治疗LDH相关作用机制提供科学依据。方法:1、利用TCMSP数据库、化学专业数据库获取身痛逐瘀汤中各味中药的相关化学成分,于SwissTargetPrediction平台实现活性成分靶点预测;分别于GeneCards、OMIM、DisGeNET数据库检索LDH疾病靶点,汇总去除重复值获得疾病LDH靶点集;将中药成分靶点与LDH靶点取交集靶点,即身痛逐瘀汤治疗LDH的潜在作用靶点;应用Cytoscape软件构建绘制身痛逐瘀汤治疗LDH的中药-化学成分-交集靶点网络图;将身痛逐瘀汤治疗LDH的潜在作用靶点导入String数据库,完成蛋白质相互作用分析及关键靶点的筛选,并运用Cytoscape构建网络图;通过DAVID平台对关键靶点进行GO和KEGG富集分析,进而探究身痛逐瘀汤治疗LDH的作用机制。2、选取髓核细胞作为实验研究对象,分为单纯压力组与中药组（加入身痛逐瘀汤中药血清干预）,置于静水压加载装置,1MPa加压干预下作用2、4、6h,应用电子显微镜观察髓核细胞超微结构变化,应用凋亡试剂盒检测髓核细胞的凋亡情况,通过Western blot检测髓核细胞NF-κB p65、MMP-13、Caspase3蛋白的表达情况。结果:1、筛选得到身痛逐瘀汤121个活性成分和871个作用靶点,其中包括β-谷固醇、槲皮素、山奈酚、黄芩素等核心成分;LDH疾病相关靶点438个,与中药成分交集靶点75个,对交集靶点进行蛋白质互相作用网络分析获取关键作用靶点69个,包括STAT3、IL6、VEGFA、MAPK1、TP53、MMP13、MMP9 等;GO 及 KEGG 富集分析显示:关键靶点主要在质膜、细胞核、细胞质等位置发挥作用,并通过细胞增殖的正调控、凋亡的负调控、信号转导等生物过程,发挥激酶活性、与蛋白质结合等分子功能;关键靶点主要通过参与癌症通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、NF-κB信号通路等信号通路对LDH进行调控。2、同一作用时间下,电镜下经身痛逐瘀汤干预组髓核细胞的突起破坏程度较单纯压力组低,超微结构更完整;细胞凋亡结果显示,中药组凋亡率明显低于单纯压力组;Western blot检测显示,中药组NF-κB p65、MMP-13、Caspase3的蛋白表达水平明显低于单纯压力组（p＜0.05）。结论:身痛逐瘀汤中β-谷固醇、槲皮素、山奈酚、黄芩素等多种有效成分,通过作用于多种靶点,激活多个信号通路协同发挥治疗LDH;实验初步验证了身痛逐瘀汤可减少髓核细胞凋亡,其作用机制可能与NF-κB信号通路的抑制以及细胞外基质的分解代谢相关。
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