【摘 要】
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目的:将载有转录因子Tbx18的腺病毒转染至升主动脉平滑肌细胞,观察重编程细胞功能和表型的改变,探讨转录因子Tbx18在体外对升主动脉平滑肌细胞的重编程作用。方法:采用组织块贴壁法培养升主动脉平滑肌细胞（VSMCs）,贴壁4～7天后在光学显微镜下观察细胞形态,细胞传代后随机分为Null组（空白组）、GFP组（对照组）、Tbx18组,Tbx18组转染携带Tbx18和GFP腺病毒,GFP组转染等量GF
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目的:将载有转录因子Tbx18的腺病毒转染至升主动脉平滑肌细胞,观察重编程细胞功能和表型的改变,探讨转录因子Tbx18在体外对升主动脉平滑肌细胞的重编程作用。方法:采用组织块贴壁法培养升主动脉平滑肌细胞（VSMCs）,贴壁4～7天后在光学显微镜下观察细胞形态,细胞传代后随机分为Null组（空白组）、GFP组（对照组）、Tbx18组,Tbx18组转染携带Tbx18和GFP腺病毒,GFP组转染等量GFP腺病毒,Null组不转染病毒。病毒转染4天后通过RT-q PCR和Western blot检测3组特异性基因Nkx2.5、ISL1、Shox2、Tbx3、HCN4、Cx43和c Tn I表达水平;通过免疫荧光技术检测Tbx18组和GFP组HCN4蛋白表达。然后体外模拟心肌微环境,将重编程细胞与原代大鼠乳鼠心肌细胞进行共培养,观察各组细胞的搏动频率及通过膜片钳技术检测重编程细胞的内向电流与动作电位。结果:原代VSMCs呈长梭形,增殖速度较快。病毒转染3天后进行检测,结果显示:与GFP组和Null组比较,Tbx18组ISL1、Shox2、Tbx3、HCN4和c Tn I m RNA和蛋白表达明显上调,Cx43m RNA和蛋白水平明显降低,且NKx2.5蛋白表达明显降低,且差异有统计学意义（P＜0.05）。免疫荧光结果显示:在荧光显微镜下Tbx18组可见HCN4蛋白（红色荧光）,并且与细胞转染的绿色荧光及细胞核蓝色荧光大致重合,而GFP组几乎没有红色荧光。在共培养第3天,VSMCs与乳鼠心肌细胞之间形成明显耦联,且Tbx18+NRVMs组细胞搏动频率明显增加（178.00±7.55 bpm,P＜0.05）,并且通过膜片钳记录到If电流及类似窦房结的动作电位。结论:转录因子Tbx18能够明显改变VSMCs形态及功能。所以Tbx18在体外具有将升主动脉平滑肌细胞重编程为起搏样细胞的潜力。
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