免疫组化方法示踪PRV感染肛门括约肌的神经传导研究

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伪狂犬病病毒是畜牧生产上一个重要的病毒,严重危害着养猪业的健康发展,同时作为神经示踪研究中的一种新兴的模式病毒,也被科学家们广泛关注和研究。本研究测定了实验室构建的伪狂犬病毒株SA215-T的病毒滴度,并用该毒株感染SD大鼠,建立了SA215-T人工感染大鼠的病理模型。感染56小时后,大鼠出现发热,奇痒和共济失调等症状,115小时左右开始死亡,解剖病变主要为肺轻度水肿,脑组织弥漫性出血。PRV SA215-T感染大鼠后平均存活时间120小时,比PRV Bartha-K61株感染大鼠的平均存活时间114小时稍长,PRV SA215-T适合用于建立PRV人工感染大鼠的病理模型。本研究分别用PRV SA215-T与Bartha-K61人工感染大鼠,观察记录了大鼠感染伪狂犬病毒后的临床症状及存活情况,在不同时间解剖大鼠并采集心肝脾肺肾脑等组织器官,通过PCR检测PRV抗原在大鼠体内各组织器官的分布规律。结果表明,大鼠感染PRV之后的48小时内,各组织器官内未检测到PRV抗原;感染56小时左右,肺脏PRV抗原呈阳性分布;随着时间的推移,组织器官中PRV抗原分布越来越广,最终几乎遍布于所有组织器官。本研究建立了间接免疫组化检测PRV抗原的方法并优化了免疫组化条件。用建立的免疫组化方法可以便捷地检测到大鼠组织器官中的PRV抗原。该方法快速简单,敏感性高,特异性强,染色结果便于观察,能用于临床检测。本研究用建立的间接免疫组化方法检测并定位了人工感染大鼠后PRVSA215-T在脊髓中的位置,示踪了PRV感染大鼠肛门括约肌的神经传导通路:感染后48小时在腰髓4-5节段初次检测到PRV;感染56小时左右,胸髓11-12节段检测到PRV;感染66小时左右在颈髓6-7节段检测到PRV;感染72小时在大脑检测到PRV。基因缺失后的伪狂犬病毒具有逆神经传导特性,用免疫组化方法可以特异性地追踪其在神经传导中的路径。本研究通过建立的大鼠病理模型,探明了PRV感染大鼠肛门括约肌的神经传导通路,为进一步研究先天性肛门闭锁症的发病机制及发展规律奠定了基础。
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