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急性肺损伤（Acute Lung Injury，ALI）/急性呼吸窘迫综合征（Acute Respiratory Distress Syndrome，ARDS）是临床常见的危重病，致死率高。肺成纤维细胞是肺组织主要的间质细胞，在肺部炎症中成纤维细胞除了通过合成胶原及其他组织连接成分以为维持器官功能的稳定，还能积极参与机体对炎症反应的调控。环氧化酶-2（Cyclooxygenase2,COX-2）是前列腺素代谢过程中的关键酶，通过产生下游前列腺素不仅能促进炎症反应的发生还能发挥抗炎、促进炎症消退（Inflammatory Resolution）的作用。特异性促消退介质（Specialized Pro-resolving Mediator，SPM），被称为是炎症反应的“刹车信号”，而保护素DX（Protectin DX,PDX）是新近发现的该家族成员之一，能够通过多种途径发挥抗炎促消退作用，但其具体作用机制目前仍不是十分清楚。
目前尚未有文章报导PDX是否可以通过COX-2途径促进内毒素性肺损伤炎症消退。
目的：
本实验通过给予脂多糖（LPS）建立内毒素性肺损伤的体内和体外模型，观测COX-2随时间进展的动态变化并检测PDX是否具有促进肺部炎症消退的作用，探讨PDX是否可以通过COX-2途径促进内毒素性肺损伤炎症消退，旨为PDX将来临床运用提供理论依据。
方法：
细胞实验：体外培养原代大鼠肺成纤维细胞。①LPS（1μg/ml）分别刺激0h、6h、12h、24h、48h、72h，提取细胞总蛋白。②LPS（1μg/ml）刺激24h后分别给予SP600125(JNK抑制剂，10μM)、SB203580（P38MAPK抑制剂，10μM）、MG-132（NF-κB抑制剂，10μM），提取总蛋白。③LPS分别刺激0h、48h，提取细胞核蛋白。④LPS刺激24h后给予不同剂量的PDX（1nM、50nM、100nM），于48h提取总蛋白。⑤LPS刺激24h后给予PDX（100nM）以及在给予PDX前1h给予保护素受体（ALX）抑制剂（BOC-2），于48h提取总蛋白。⑥LPS刺激24h后给予PDX（100nM）第48h提取核蛋白。通过WB检测细胞总蛋白COX-2以及细胞核蛋白NF-κB亚基p50、p65、Rel B的变化。
动物实验：随机选取SD大鼠（200-250g）,尾静脉注射LPS（3mg/kg）建立内毒素性肺损伤模型。①于造模后0h、6h、12h、24h、48h、72h取肺。②在炎症高峰期（12h）给予PDX（5μg/kg）或在给予PDX前1h给予MG-132（NF-κB抑制剂，1mg/kg）。通过组织病理学染色（H&E染色）检测肺组织损伤情况;Western Blot（WB）检测COX-2的表达;qPCR检测肺组织匀浆炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α转录水平的变化。酶联免疫法（ELISA）检测大鼠肺组织匀浆PGE2、PGD2的表达。
结果：
①LPS（1μg/ml）刺激原代肺成纤维细胞后,其COX-2蛋白随时间进展呈双峰表达，第一峰出现在6-12h（P＜0.001），第二峰于第48h表达（P＜0.05）;②NF-κB p50/p50二聚体介导COX-2第二峰表达（P＜0.0001）;③PDX能够剂量依赖性地促进COX-2第二峰表达，并且当其剂量为100nM时促进作用最显著（P＜0.05）;④PDX可以促进48h时细胞核内NF-κB亚基p50的含量(P＜0.05);⑤PDX促进COX-2第二峰表达的作用受到了保护素受体抑制剂(BOC-2)的抑制(P＜0.0001);⑥肺组织病理学结果以及肺组织炎症因子转录水平表达结果显示，在尾静脉给予LPS(3mg/kg)建立的肺损伤模型中，肺组织COX-2蛋白随时间进展呈现双峰表达，于6h时出现第一峰（P＜0.0001），第24h出现第二峰（P＜0.001）;⑦大鼠肺组织匀浆PGE2仅在6h表达增加（P＜0.0001），而PGD2呈双峰表达，第一峰出现在6h（P＜0.0001）、第二峰于24h表达（P＜0.0001），并且24h的表达显著高于6h（P＜0.0001）;⑧PDX促进肺组织COX-2第二峰表达（P＜0.0001），且该作用受到了保护素受体抑制剂(BOC-2)的抑制（P＜0.0001）;⑨在体组织病理学结果显示PDX促进内毒素性肺损伤的炎症消退（P＜0.0001），而提前给予NF-κB抑制剂（MG-132）可以明显抑制PDX的促炎症消退作用（P＜0.0001）。
结论：
在内毒素性肺损伤模型中，COX-2随时间进展呈双峰表达。第一峰出现在炎症发生阶段，主要介导下游PGE2表达，具有促进炎症反应的作用。第二峰出现在炎症消退阶段，介导下游PGD2的表达，与促进炎症消退的有关。我们的研究结果证实炎症消退期NF-κB p50信号通路的激活可能是COX-2第二峰表达的内在机制。PDX可以通过ALX促进NF-κB p50/p50的激活使得COX-2表达增加从而发挥促进炎症消退的作用。
目前尚未有文章报导PDX是否可以通过COX-2途径促进内毒素性肺损伤炎症消退。
目的：
本实验通过给予脂多糖（LPS）建立内毒素性肺损伤的体内和体外模型，观测COX-2随时间进展的动态变化并检测PDX是否具有促进肺部炎症消退的作用，探讨PDX是否可以通过COX-2途径促进内毒素性肺损伤炎症消退，旨为PDX将来临床运用提供理论依据。
方法：
细胞实验：体外培养原代大鼠肺成纤维细胞。①LPS（1μg/ml）分别刺激0h、6h、12h、24h、48h、72h，提取细胞总蛋白。②LPS（1μg/ml）刺激24h后分别给予SP600125(JNK抑制剂，10μM)、SB203580（P38MAPK抑制剂，10μM）、MG-132（NF-κB抑制剂，10μM），提取总蛋白。③LPS分别刺激0h、48h，提取细胞核蛋白。④LPS刺激24h后给予不同剂量的PDX（1nM、50nM、100nM），于48h提取总蛋白。⑤LPS刺激24h后给予PDX（100nM）以及在给予PDX前1h给予保护素受体（ALX）抑制剂（BOC-2），于48h提取总蛋白。⑥LPS刺激24h后给予PDX（100nM）第48h提取核蛋白。通过WB检测细胞总蛋白COX-2以及细胞核蛋白NF-κB亚基p50、p65、Rel B的变化。
动物实验：随机选取SD大鼠（200-250g）,尾静脉注射LPS（3mg/kg）建立内毒素性肺损伤模型。①于造模后0h、6h、12h、24h、48h、72h取肺。②在炎症高峰期（12h）给予PDX（5μg/kg）或在给予PDX前1h给予MG-132（NF-κB抑制剂，1mg/kg）。通过组织病理学染色（H&E染色）检测肺组织损伤情况;Western Blot（WB）检测COX-2的表达;qPCR检测肺组织匀浆炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α转录水平的变化。酶联免疫法（ELISA）检测大鼠肺组织匀浆PGE2、PGD2的表达。
结果：
①LPS（1μg/ml）刺激原代肺成纤维细胞后,其COX-2蛋白随时间进展呈双峰表达，第一峰出现在6-12h（P＜0.001），第二峰于第48h表达（P＜0.05）;②NF-κB p50/p50二聚体介导COX-2第二峰表达（P＜0.0001）;③PDX能够剂量依赖性地促进COX-2第二峰表达，并且当其剂量为100nM时促进作用最显著（P＜0.05）;④PDX可以促进48h时细胞核内NF-κB亚基p50的含量(P＜0.05);⑤PDX促进COX-2第二峰表达的作用受到了保护素受体抑制剂(BOC-2)的抑制(P＜0.0001);⑥肺组织病理学结果以及肺组织炎症因子转录水平表达结果显示，在尾静脉给予LPS(3mg/kg)建立的肺损伤模型中，肺组织COX-2蛋白随时间进展呈现双峰表达，于6h时出现第一峰（P＜0.0001），第24h出现第二峰（P＜0.001）;⑦大鼠肺组织匀浆PGE2仅在6h表达增加（P＜0.0001），而PGD2呈双峰表达，第一峰出现在6h（P＜0.0001）、第二峰于24h表达（P＜0.0001），并且24h的表达显著高于6h（P＜0.0001）;⑧PDX促进肺组织COX-2第二峰表达（P＜0.0001），且该作用受到了保护素受体抑制剂(BOC-2)的抑制（P＜0.0001）;⑨在体组织病理学结果显示PDX促进内毒素性肺损伤的炎症消退（P＜0.0001），而提前给予NF-κB抑制剂（MG-132）可以明显抑制PDX的促炎症消退作用（P＜0.0001）。
结论：
在内毒素性肺损伤模型中，COX-2随时间进展呈双峰表达。第一峰出现在炎症发生阶段，主要介导下游PGE2表达，具有促进炎症反应的作用。第二峰出现在炎症消退阶段，介导下游PGD2的表达，与促进炎症消退的有关。我们的研究结果证实炎症消退期NF-κB p50信号通路的激活可能是COX-2第二峰表达的内在机制。PDX可以通过ALX促进NF-κB p50/p50的激活使得COX-2表达增加从而发挥促进炎症消退的作用。