论文部分内容阅读
[目的]机械灌注(Machine perfusion,MP)可为离体器官输送代谢底物并带走代谢产物,从而减轻器官的损伤,这是改善离体器官功能的方法之一。常温机械灌注(Normothermic machine perfusion,NMP)能在生理温度下向离体器官提供氧气和营养物质,同时排出代谢废物。因此,NMP不仅恢复了组织的正常代谢活动,还减少组织的缺血再灌注损伤,是一种理想的器官保存方式。NMP目前已被证实有利于肝、肾、肺和心脏移植,其保存效果明显优于传统的静态冷保存(Static cold storage,SCS)。但MP主要应用于实体脏器移植中,在小肠这类空腔脏器移植的研究较少,目前该技术在小肠移植中仍处于临床前期研究。目前尚未有NMP保存猪小肠对肠道机械屏障保护作用的研究。本研究通过比较常规静态冷保存和NMP灌注保存对肠道屏障的影响,评估NMP对保存肠道屏障的作用是否优于常规静态保存,从而为减轻小肠移植缺血再灌注损伤提供更优的方案。[方法]本课题通过建立猪小肠NMP模型,分别采用常温机械灌注与冷保存保存猪小肠空肠段,测定各个时间点小肠粘膜病理情况,通过HE染色、免疫组化、免疫荧光染色等评价供肠粘膜屏障损伤情况,探讨NMP对猪DCD供肠粘膜屏障的保护作用。[结果]1.成功建立NMP灌注装置,维持稳定的温度、压力、流量,并对实验组供肠进行灌注。2.正常小肠组织肠粘膜表现为肠绒毛完整;热缺血后小肠粘膜仍基本保持正常,Chiu氏评分0～1分;UW组2h、4h均为轻度粘膜损伤;NMP组2h、4h、6h也表现为轻度粘膜损伤;UW组6h小肠粘膜上皮层与固有层大量分离(2～4分),可见毛细血管明显扩张充血,并有少量绒毛破损。3.正常小肠粘膜可见绒毛上有大量的GCs分布;热缺血后小肠组织粘膜上上仍有大量GCs分布;UW组2h、4h及NMP组2h、4h、6h小肠粘膜上GCs仍有较多分布,而UW组6h小肠粘膜GCs则明显减少。4.在正常的肠粘膜上,Bcl-2与Bax表达均正常,Bcl-2、Bax的免疫组化评分(Immunohistochemical score,IHS)为较弱免疫反应(1～3分);热缺血后小肠粘膜Bcl-2、Bax的IHS为较弱免疫反应(2～4分);NMP组4h、6h小肠组织Bcl-2的表达较其他各组均明显上调(P<0.05),IHS为6～9分;UW组4h、6h小肠组织Bax的表达较其他各组均明显上调(P<0.05),其IHS为中等强度以上免疫反应(8～9分)。5.在正常小肠组织中,ZO-1广泛表达于小肠绒毛,热缺血后小肠组织ZO-1蛋白仍能保持与正常小肠组织相近;NMP组2h、4h的ZO-1仍能保持基本连续分布的状态,6h后ZO-1于小肠绒毛处出现部分不连续的状态;UW组2h的ZO-1保持基本连续状态,4h后出现部分不连续,6h后绒毛ZO-1出现广泛消失。[结论]本研究认为NMP可明显减少小肠粘膜组织损伤、减少细胞凋亡,并有效减少ZO-1下调,对小肠粘膜屏障具有较好的保护作用,较使用UW液SCS具有明显的优势。