【摘 要】
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目的:基质细胞蛋白（MCPs）与肿瘤的发生发展关系息息相关。睾丸蛋白聚糖2（SPOCK2）蛋白作为MCPs的一员,已被报道在多种疾病中发挥作用。本文旨在探讨SPOCK2在肺腺癌发生发展中的作用及其转录表达调控机制。方法:1、从GEO和TCGA公共数据库下载非小细胞肺癌患者的相关数据,分析SPOCKs在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达差异,探究SPOCK2的表达量与非小细胞肺癌患者临床病理参数及预
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目的:基质细胞蛋白（MCPs）与肿瘤的发生发展关系息息相关。睾丸蛋白聚糖2（SPOCK2）蛋白作为MCPs的一员,已被报道在多种疾病中发挥作用。本文旨在探讨SPOCK2在肺腺癌发生发展中的作用及其转录表达调控机制。方法:1、从GEO和TCGA公共数据库下载非小细胞肺癌患者的相关数据,分析SPOCKs在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达差异,探究SPOCK2的表达量与非小细胞肺癌患者临床病理参数及预后的关系。2、利用CCLE数据库分析不同人肺腺癌细胞系中SPOCK2 mRNA的表达,选择合适的细胞株进行后续生物学实验。3、以人肺腺癌细胞cDNA为模板,通过PCR扩增SPOCK2的CDS目的片段,构建SPOCK2过表达的重组质粒pCDH-SPOCK2,通过慢病毒包装系统获得SPOCK2过表达慢病毒载体（LV-SPOCK2）及空病毒对照载体（LV）。用LV-SPOCK2及LV感染A549细胞,获得过表达SPOCK2的细胞A549-SPOCK2和空病毒对照细胞A549-Vector。荧光显微镜检测慢病毒介导的转基因效率,同时行Western blot检测外源性SPOCK2蛋白在A549细胞中过表达效率。4、CCK-8细胞增殖实验检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力。5、维甲酸X受体（RXR）激动剂贝沙罗汀以不同浓度梯度和时间梯度处理A549细胞,qRT-PCR法检测SPOCKs mRNA的表达情况,Western blot法检测SPOCK2蛋白的表达情况。6、双荧光素酶报告系统实验筛选SPOCK2启动子区贝沙罗汀作用的具体位点;染色质免疫共沉淀实验检测RXRα与SPOCK2启动子区的结合情况。结果:1、SPOCK2在非小细胞肺癌癌旁组织中的表达水平明显高于癌组织;在肺腺癌患者中,SPOCK2的表达水平与淋巴结转移情况成负相关;高SPOCK2水平与肺腺癌患者较长的总生存期和疾病特异性生存期正相关,也是疾病特异性生存期的独立保护因素。2、分析了实验室保种的3种人肺腺癌细胞株中SPOCK2 mRNA表达量,选择表达量居中的A549细胞进行后续生物学实验。3、成功建立了过表达SPOCK2的肺腺癌细胞株A549-SPOCK2和空病毒对照细胞株 A549-Vector。4、慢病毒介导的SPOCK2过表达可抑制A549细胞的体外增殖和迁移能力。5、贝沙罗汀处理后A549细胞中SPOCK2的表达增加,且呈浓度和时间依赖。6、在A549细胞中,贝沙罗汀能够增强SPOCK2启动子活性,通过截短突变和定点突变检测出SPOCK2启动子区贝沙罗汀作用的具体区域为预测的RXRα结合位点（-518bp--505bp）,且转录因子RXRα能够与该位点直接结合。结论:1、SPOCK2在人非小细胞肺癌中表达降低,其表达水平与肺腺癌淋巴结转移情况存在相关性,且高表达SPOCK2是肺腺癌的良好预后因素。2、上调SPOCK2的表达可抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移。3、在肺腺癌细胞中,贝沙罗汀可激活RXRα/SPOCK2信号轴上调SPOCK2的表达,可能是其抑制肺腺癌细胞活力的分子机制。
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