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研究目的:探讨Kisspeptin在复发性流产中参与调控子宫内膜蜕膜化机制。通过干预Kisspeptin表达对子宫内膜蜕膜化的影响,研究Kisspeptin与Notch1等分子之间的关系,为复发性流产的临床治疗提供理论依据。方法:1、临床研究:收集2020年6月至2020年12月至苏州大学附属第二医院生殖中心及计划生育门诊就诊的45例复发性流产及50例正常妊娠患者蜕膜组织,利用 RT-PCR 法及 Western Blot 法测定 Kisspeptin、Notch1、Akt、Foxo1、IGFBP1表达情况。2、体外实验:（1）人类子宫内膜基质细胞（Human endometrial stromal cells,hESC）细胞诱导分化培养检测蜕膜化情况。（2）hESC细胞直接添加Kisspeptin观察蜕膜化变化。（3）通过SiRNA处理敲除KiSS1基因,并验证敲除效果。通过对正常hESC细胞、hESC细胞添加Kisspeptin及SiRNA敲除KiSS1的hESC细胞比较,观察Kisspeptin对蜕膜化及Notch1的影响。（4）采用Notch1、Akt、Foxo1三者对应的抑制剂DAPT、AZD5363及AS1842856的不同处理,检测蜕膜化及Notch1/Akt/Foxo1信号通路表达情况,探讨Notch1/Akt/Foxo1信号通路分子调控蜕膜化的机制。（5）用CCK8测定Kisspeptin对hESC细胞增殖的影响。（6）免疫荧光观察Kisspeptin对蜕膜化、Notch1表达影响。3、动物实验:（1）通过正常妊娠模型小鼠（雄性BALB/c小鼠×雌性CBA/j）注射生理盐水及Kisspeptin抑制剂Kisspeptin234对比;（2）复发流产模型小鼠（雄性DBA/2×雌性CBA/j）注射生理盐水及与添加Kisspeptin10做对比;观测小鼠妊娠胚胎数、Notch1信号通路表达、蜕膜化情况,并且进一步验证Notch1/Akt/Foxo1信号通路与蜕膜化及妊娠结局的相关性。结果:1、复发性流产患者蜕膜组织中,蜕膜化标志物IGFBP1mRNA表达复发性流产患者组较正常妊娠女性低（P＜0.05）,IGFBP1蛋白相比具有统计学差异（P＜0.05）;KiSS1 mRNA低表达（P＜0.001）,Kisspeptin蛋白表达同样具有统计学差异（P＜0.01）;Notch1、Akt、Foxo1mRNA在复发性流产患者组中表达水平均低于正常妊娠组（P＜0.01）,Notch1、Akt、Foxo1蛋白表达同样均是复发性流产组低（P＜0.05）。2、（1）在hESC细胞中,诱导分化培养使得脱膜化程度随培养时间增加愈发明显。（2）Kisspeptin能够低程度的自发诱导蜕膜化形成,蜕膜化效果随时间延长而增加。（3）SiRNA敲除KiSS1基因后KiSS1mRNA和Kisspeptin蛋白表达均明显下降。添加Kisspeptin后蜕膜化能力加强,敲除KiSS1后蜕膜化能力减弱。对于Notch1/Akt/Foxo1信号通路,添加Kisspeptin后通路相关分子表达增加,转染SiRNA则表达降低。添加Kisspeptin10后相比对照组IGFBP1蛋白表达升高（P＜0.05）,IGFBP1mRNA 上升（P＜0.01）;SiRNA 处理 KiSS1 组 IGFBP1 蛋白表达降低（P＜0.05）,IGFBP1mRNA 下降（P＜0.01）。（4）hESC 细胞中 Notch1、Akt、Foxo1均有表达,分别采用Notch1、Akt、Foxo1三者对应抑制剂DAPT、AZD5363及AS1842856处理后,诱导分化培养hESC细胞5天,不同位点抑制Notch1/Akt/Foxo1信号通路后,发现各组中Notch1、Akt、Foxo1蛋白及mRNA表达下降趋势不同,Notch1抑制剂对Notch1、Akt、Foxo1均产生下调影响,Akt抑制剂对Akt、Foxo1产生下调影响,但对Notch1无影响,Foxo1抑制剂对Notch1、Akt 无影响,Foxo 1 下调。加入抑制剂 DAPT、AZD53 63、AS 1842856 后 IGFBP 1mRNA及蛋白表达明显下降。（5）Kisspeptin对hESC细胞增殖几乎无任何作用。（6）免疫荧光检查见增殖状态培养的hESC细胞呈细长形态,细胞表达Notch1;诱导分化培养5天后细胞形态变圆、变大,表达Notch1能力更强;添加Kisspeptin10组细胞形态进一步变圆,Notch1表达增多;SiRNA敲除KiSS1组细胞形态不及诱导分化培养组圆润,Notch1表达有下降。3、动物实验中,正常妊娠模型小鼠注射Kisspeptin234与注射生理盐水组比较,可见存活胚胎数目减少,吸收胎增多,差异存在统计学意义（P＜0.05）,Notch1、Akt、Foxo1mRNA 较生理盐水组均有下降,Notch1（P＜0.01）,Akt、Foxo1（P＜0.05）,Notch1、Akt、Foxo1蛋白表达也较生理盐水组均有下降（P＜0.05）,蜕膜化标志物IFGBP1的mRNA表达降低（P＜0.01）,IGFBP1蛋白表达下降（P＜0.05）。复发性流产模型小鼠注射Kisspeptin10后存活胚胎数目增多,吸收胎减少,差异存在统计学意义（P＜0.05）,Notch1、Akt、Foxo1mRNA表达较生理盐水组均有升高Akt（P＜0.05）,Notch1、Foxo1（P＜0.01）,蛋白表达具有统计学差异Notch1（P＜0.05）,Akt、Foxo1（P＜0.01）,蜕膜化标志物 IFGBP1 的 mRNA 表达升高（P＜0.01）,IGFBP1 蛋白表达上升（P＜0.05）。结论:1、复发性流产患者蜕膜组织中Kisspeptin表达下降,并伴随着蜕膜化程度降低,提示Kisspeptin低表达与蜕膜化异常有关并导致流产;Notch1、Akt、Foxo1均下调,说明三者可能是同一信号通路上的不同上下游分子,并与Kisspeptin关系密切。2、体外细胞实验提示Kisspeptin是Notch1信号通路信号上游分子,并能够影响hESC细胞的蜕膜化。信号通路是按Notch1/Akt/Foxo1次序,调控hESC细胞蜕膜化。3、在小鼠模型中阻断Kisspeptin后流产率增加,蜕膜化指标下降,下调Notch1/Akt/Foxo1的信号通路分子表达。给予Kisspeptin后逆转妊娠结局,子宫内膜蜕膜化情况改善,妊娠率得到提高,Notch1/Akt/Foxo1的信号通路分子表达上调。