大量实验表明,氧化应激引起的卵巢颗粒细胞凋亡是雌性动物体内卵泡闭锁的主要原因。研究氧化应激条件下卵巢颗粒细胞凋亡的调控机制,可以为治疗动物卵泡异常闭锁及不孕提供完整的理论依据和药物靶点。Forkhead box protein O转录因子(FoxO)是Fox家族中研究最深入的O亚家族成员,它参与了细胞的增殖、DNA损伤修复、凋亡、分化、代谢等过程。本实验室前期研究表明氧化应激下FoxO1在颗粒细胞凋亡中表达量显著上升,然而FoxO1如何发挥调控机制尚不清楚。本文旨在探讨氧化应激条件下,FoxO1表达与核定位特点以及对下游基因调控作用。通过对双氧水处理的氧化应激引起体外培养小鼠卵巢颗粒细胞模型研究,我们发现C-Jun氨基末端激酶(C-JunNH2-Terminal Kinase,JNK)活性随着双氧水浓度的变化而显著升高。而本实验室前期研究表明FoxO1参与了卵巢颗粒细胞的凋亡。由此我们推测JNK参与了 FoxO1介导氧化应激引起的颗粒细胞凋亡。当通过向细胞培养液中添加JNK的抑制剂抑制JNK活性时,TUNEL荧光染色结果表明卵巢颗粒细胞的凋亡率显著下降。利用免疫荧光技术,我们发现JNK作为一种应激活化蛋白激酶可调控FoxO1转录因子的核定位。进一步实验发现,氧化应激处理颗粒细胞,可导致细胞内FoxO1进入细胞核后mRNA水平和蛋白水平显著升高。通过荧光素酶报告系统质粒的构建,我们发现,FoxO1具有启动自身转录的功能,它可以结合到自身基因的启动子上启动转录,从而放大自身调节作用。本研究还进一步的验证了 FoxO1作为转录因子影响的靶基因mRNA水平的变化。发现促凋亡基因puma在卵巢颗粒细胞凋亡过程中中表达量升高。其表达水平升高受到FoxO1的调控。本研究通过探讨氧化应激引起卵巢颗粒细胞凋亡的调控机制,进一步完善卵泡闭锁的分子机理,从而为提高母畜的繁殖能力和治疗人类的生殖疾病提供研究依据。