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连作土壤中有害菌的激增是导致连作障碍的主要原因,为了探究引发葡萄连作障碍的主要有害菌,本试验以不同地区的连作土壤为研究对象,采用传统的稀释平板法和高通量测序技术,探究了连作对葡萄根际土壤细菌和真菌种群结构的影响;分离、鉴定了不同地区葡萄连作土壤中优势细菌和真菌,进一步采用盆栽试验验证了主要优势真菌的致病性,主要试验结果如下:1.分离鉴定了葡萄连作土壤中的优势细菌和真菌。通过传统的平板法在辽宁沈阳、熊岳、锦州三个地区的4个葡萄连作园土壤中鉴定出优势细菌43株,分别属于7个属,即假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、节杆菌属(Arthrobacter sp.)、微球菌属(Micrococcus sp.)、微杆菌属(Microbacterium sp.)、纤维微菌属(Cellulosimicrobium sp.)、剑菌属(Ensifer sp.),其中假单胞菌属(Pseudomonas sp.)数量最多,其次为芽胞杆菌属(Bacillus sp.)。鉴定出优势真菌42株,分别属于11个属,即孢子丝菌属(Sporothrix sp.)、粉红粘帚霉(Clonostachys rosea)、毛霉属(Mucor sp.)、木霉属(Trichoderma sp.)、枝孢菌属(Cladosporium sp.)、镰孢菌属(Fusarium sp.)、链格孢属(Alternaria sp.)、未培养的接合菌(uncultured zygomycete)、葡萄球菌属(Stagonosporopsis sp.)、孢霉属(Mortierella sp.)。2.连作改变了土壤细菌和真菌的种群结构。通过16S rDNA测序共鉴定出13种不同属细菌。与对照相比,地杆菌属(Pedobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus)、德奥斯氏菌属(Devosia)、红游动菌属(Rhodoplanes)、假单胞菌属(Pseudomonas)、Steroidobacter的含量显著升高;而丰祐菌属(Opitutus)含量显著降低;黄杆菌属(Flavobacterium)、金黄杆菌(Chryseobacterium)、叶杆菌属(Phyllobacterium)和Kaistobacter在连作土壤中含量显著升高(除XY之外)。通过18S rDNA测序共鉴定出12种不同属真菌,其中枝孢霉属(Cladosporium)、Mrakiaceae(XY除外)、Xanthomendoza(XY除外)的含量在连作土壤中显著升高;链格孢属(Alternaria)在BZ连作土壤显著升高;镰孢菌属(Fusarium)在SY连作土中显著升高;毛壳霉(Chaetomium)、亚隔孢壳属(Didymella)和锥毛壳属(Coniochaeta)含量显著低于对照。3.验证了三种优势真菌的致病性。对细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)、细孢枝孢(Cladosporium perangustum)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani)三种优势真菌的致病性进行了验证。盆栽土壤接入三种菌种后,贝达葡萄((V.riparia×V.labrusca cv.Beta)实生苗叶片感病,在接种的第12 d时开始出现死亡现象,致病性显著。4.测定了三种优势真菌在连作土壤中的绝对含量。结果表示链格孢菌(Alternaria)在BZ连作土壤中的绝对含量显著高于空白土壤;枝孢菌(Cladosporium)在连作土壤中的绝对含量显著升高(BD除外);镰孢菌(Fusarium)在葡萄连作土壤中的绝对含量均显著高于空白土壤。