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鸡胚在发育过程中仅依靠鸡蛋中沉积的营养物质来维持,不与外界进行物质交换,因此只能通过自身来代谢废物。同时由于发育过程中机体代谢增加,鸡胚在发育过程中产生了大量的活性氧堆积在机体当中,而高水平的活性氧会对蛋白、脂质和DNA造成损伤。研究发现鸡胚中的过氧化物酶(Peroxidase,POD)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)形成第一道抗氧化防御线,这道防御线共同发挥作用来抵御活性氧对机体造成的损伤。在整个鸡胚发育过程中,这些抗氧化酶发挥了重要的作用,酶的活性也随之不停的发生变化。因此明确调控抗氧化酶的作用机制至关重要,但目前该方面的研究尚少。因此本研究基于课题组前期转录组测序的研究,进一步通过蛋白组测序分别对Day12、Day16、Day20的鸡胚蛋肝脏组织进行研究,鉴定鸡胚发育过程中调控抗氧化酶的关键蛋白,以此探究鸡胚发育过程中抗氧化酶的调控机制。本研究开展了三方面的内容:1.鉴定影响抗氧化酶活性的关键蛋白:通过对Day12、Day16、Day20的鸡胚肝脏进行蛋白组测序,筛选差异蛋白,通过GO富集分析和KEGG Pathway富集分析,筛选出与抗氧化酶活性相关差异蛋白和富集通路。试验一共筛选出389个差异蛋白,50条富集通路。其中与抗氧化相关的差异蛋白包括:APOA1、APOA4、APOH、GPX1、GPX3、TTPA、HSP90AB1等。与抗氧化相关的KEGG Pathway包括:谷胱甘肽代谢途径、乙醛酸和二羧酸代谢途径和丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代谢途径等。综合分析确定将GPX1,GPX3,HAO2、TATP等蛋白作为影响抗氧化酶活性的关键候选蛋白进行后续的验证。2.建立鸡胚肝细胞氧化模型:为研究肝细胞参与的抗氧化作用机制,本研究通过培养鸡胚的肝细胞作为氧化模型,检测不同浓度过氧化氢对鸡胚肝细胞氧化酶的影响。分别研究了2、4、6、8、10、12mmol/L的过氧化氢对肝细胞的影响,结果表明过氧化氢鸡胚肝细胞氧化模型的最优条件为:过氧化氢浓度8mmol/L,培养4h。3.牛磺酸介导GPX1参与调控鸡胚肝细胞抗氧化作用的机制研究:牛磺酸具有明显的抗氧化作用,本研究通过添加不同浓度的牛磺酸,筛选最适浓度。在此基础上,鉴定试验组与对照组GPX1的表达量的变化,以探究GPX1调控鸡胚肝细胞抗氧化的作用机制。结果表明:牛磺酸浓度为6.25、12.5mmol/L时可以有效抑制过氧化氢对鸡胚肝细胞的损害。定量PCR结果表明牛磺酸可以明显提高GPX1的表达量,并且基因的表达程度与牛磺酸的添加量成正比。因此表明牛磺酸可能通过介导GPX1的表达参与鸡胚抗氧化作用。本研究首次通过蛋白组学技术对鸡胚肝脏抗氧化酶体系进行了研究,通过建立鸡胚肝细胞的氧化模型,研究鸡胚发育过程中牛磺酸抑制氧化损伤的作用,并探究其对GPX1基因表达的影响。本研究为进一步研究鸡胚发育,了解在氧化应激过程中胚胎抗氧化酶的调控机制提供理论依据。