解旋酶是一类利用NTP提供能量打开DNA或RNA之间氢键的分子马达蛋白。解旋酶DHX36又被称为RHAU或G4R1,属于SF2超家族中DEAH亚家族的一类RNA解旋酶。自2004年DHX36从Hela细胞裂解物中被分离得到后,该解旋酶受到了广泛关注。前期研究发现DHX36参与哺乳动物精原细胞分化、造血与心脏发育、神经元前体微RNA树突状定位等重要生命活动,并与细胞内多个部位的m RNA的合成和降解有关。此外,DHX36在病毒免疫方面也发挥重要作用,存在于浆细胞树突状细胞中的DHX36通过特异性识别并结合富含鸟嘌呤的序列介导细胞因子应答。DHX36在体内行使多种特定生物学功能,暗示了其对底物结构以及底物序列具有一定偏好性,但是相关的酶学活性定量分析数据还未见报道。本实验选择鸽子DHX36解旋酶（Cl DHX36）作为研究对象,使用荧光各向异性法和快速停留荧光共振能量转移技术从底物结合偏好性、体外解旋条件、底物解旋特性三个方面对其酶学活性进行较为系统分析,以期为DEAH亚家族解旋酶的工作机理提供参考。同时,经过序列比对我们发现Cl DHX36与研究较为深入的牛Bos DHX36和人h DHX36在N端序列同源性很低,于是我们使用特异性蛋白水解酶在天然折叠的全长蛋白基础上切除其N端,并对酶切后该蛋白的酶学活性变化进行了测定。主要得到以下实验结果:（1）将目的基因成功构建入表达载体获得重组质粒p ET15b-sumo-Cl DHX36,并在大肠杆菌C2566H中经IPTG诱导表达得到可溶目的蛋白。通过亲和层析柱初步纯化,阳离子交换柱进一步纯化获得的目的蛋白Cl DHX36。对其聚集状态及均一性进行分析,结果表明Cl DHX36有很好的均一性,在溶液中为稳定单体形式存在。（2）Cl DHX36对底物的结构具有偏好性,对ss RNA、ss DNA、G4 DNA结合活性最佳,而对Fork、Bubble结合活性较弱,对平末端的ds DNA结合活性最差;Cl DHX36对底物的序列组成具有偏好性,倾向于结合富含鸟嘌呤的ss DNA。（3）过量的Cl DHX36与带尾链G4底物进行体外复合,会有两个蛋白分子结合在底物上,形成二聚体状态。（4）优化得到了Cl DHX36最佳体外解旋条件:20 m M Tris-HCl p H 7.5、50 m M Na Cl、1 m M Mg Cl₂、2 m M DTT、反应温度为37℃、蛋白浓度为20 n M。（5）通过比较Cl DHX36对不同底物的解旋活性差异分析其解旋特性,结果表明Cl DHX36解旋极性为3’-5’,更倾向于解旋尾链为鸟嘌呤富集的Grich或G4的双链DNA底物,且解旋活性与底物的尾链长度呈负相关性。（6）Cl DHX36经特异性蛋白水解酶切除N端得到Cl DHX36^ΔN,与全长Cl DHX36相比,Cl DHX36^ΔN对富含鸟嘌呤的ss DNA结合活性差异不大而对G4 DNA结合活性显著下降。最后分析了Cl DHX36^ΔN解旋活性的改变,发现N端序列缺失使Cl DHX36几乎丧失打开G4 DNA的能力。综上,本实验成功纯化得到了Cl DHX36蛋白,分析了该酶的底物结合偏好性和底物解旋特性,优化得到体外最佳解旋条件。明确了虽然Cl DHX36与人和牛DHX36的N端序列差异较大,但其N端都发挥着相同的结合与解旋G4的作用。