黑曲霉是一种重要的发酵工业微生物,也是研究丝状真菌生长、发育、代谢和基因功能等的模式微生物。本文以黑曲霉CICC 41702为出发菌株,建立了以pyrG为筛选标记的遗传转化系统,利用该系统成功实现了红色荧光蛋白rfp在黑曲霉中的表达。另外本文还将黑曲霉中赭曲霉毒素A（OTA）基因簇内转录因子An OTAbZIP的启动子与rfp连接,构建可视化检测An OTAbZIP表达强弱的报告菌株,为建立可视化检测黑曲霉中OTA含量奠定基础。具体内容如下:本研究构建了黑曲霉尿苷/尿嘧啶遗传转化系统。首先,构建pyrG敲除质粒pm-1,然后将pm-1质粒电转农杆菌AGL1侵染黑曲霉CICC 41702孢子,筛选获得一株稳定遗传的营养缺陷型菌株黑曲霉g-1。之后分别构建了携带pyrG本源启动子、三磷酸甘油醛脱氢酶启动子gpd A的pyrG基因作为筛选标记的回补质粒pm-2、pm-3,分别将两个质粒电转至根癌农杆菌AGL1,侵染黑曲霉g-1孢子,筛选获得多株具有本源启动子以及gpd A启动子为pyrG筛选标记的原养型随机插入转化子。实验表明带有启动子的pyrG标记基因均可使营养缺陷株恢复为野生表型,该系统的构建为之后黑曲霉的改造打下基础。rfp红色荧光蛋白是用于标记丝状真菌的最常见的荧光蛋白。在本研究中,构建了含本源启动子的pyrG基因作为筛选标记,以gpd A来调节rfp基因表达的质粒pm-5。将pm-5质粒电转AGL1后,侵染g-1菌株孢子,筛选获得多株rfp基因随机插入的转化子,转化子在荧光显微镜下观测到明亮荧光,证明rfp在黑曲霉中成功表达,这为从细胞水平研究黑曲霉中蛋白的分泌和定位奠定了基础。本文将PAnOTAbZIP与rfp红色荧光蛋白相连,构建含有红色荧光蛋白的PAnOTAbZIP的表达质粒pm-6,电转至AGL1后侵染g-1孢子,筛选获得多株随机插入转化子,检测转化子荧光强度和OTA含量的变化关系,构建可视化检测OTA含量的红色荧光蛋白报告菌株。结果表明,随培养时间变化,转化子菌丝红色荧光的强度与OTA合成量呈正相关。通过报告基因可视化检测OTA含量,可以避免HPLC检测OTA时复杂的样品处理,缩短了OTA检测时间,为黑曲霉OTA的检测提供了新思路。