【摘 要】
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研究背景和目的:近年来研究表明幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori， Hp)感染诱导胃粘膜COX-2基因的过表达是胃癌发生的重要环节。但H.pylori感染引起COX-2表达的机制尚
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研究背景和目的:近年来研究表明幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori， Hp)感染诱导胃粘膜COX-2基因的过表达是胃癌发生的重要环节。但H.pylori感染引起COX-2表达的机制尚不清楚，至今尚无理想的防治办法。本研究旨在揭示p38MAPK信号转导对H.pylori感染COX-2表达的调控机制，并探讨健脾解毒方通过p38MAPK信号通路调节H.pylori感染胃癌细胞COX-2表达的机制。
方法:根据人COX-2基因启动子序列设计两端引物，构建COX-2启动子荧光素酶报告基因重组质粒pGL3-Basic-COX-2-promoter，并进行功能鉴定。利用COX-2启动子荧光素酶报告基因及质粒转染、Real time-PCR、Western blot等方法研究:H.pylori对MKN45细胞COX-2启动子荧光素酶重组质粒转录活性和COX-2基因表达的影响；p38MAPK信号转导对H。pylori诱导的COX-2启动子转录活性和COX-2表达的调节作用；健脾解毒中药对H.pylori感染的MKN45细胞COX-2荧光素酶启动子及COX-2基因表达的影响；健脾解毒方对H。pylori感染胃癌细胞COX-2表达的p38MAPK信号转导的调控作用。
结果:成功构建含COX-2基因启动子和萤火虫荧光素酶报告基因的重组质粒pGL3-Basic-COX-2，并经过PCR、双酶切鉴定和插入片段序列的直接测序，证实为COX-2基因启动子序列，无碱基突变。H.pylori感染能够激活COX-2启动子的转录活性，并上调胃癌细胞COX-2 mRNA和COX-2蛋白表达。H.pylori能瞬时激活胃癌细胞p38MAPK和下游的转录因子ATF-2；阻断p38MAPK信号通路能够抑制H.pylori感染的胃癌细胞COX-2启动子活性和COX-2基因的表达。健脾解毒方以剂量依赖的方式抑制H.pylori感染的胃癌细胞COX-2基因表达，下调COX-2启动子的转录活性；健脾解毒方能够抑制H.pylori诱导的p38MAPK信号通路的活化，并对p38MAPK下游转录因子ATF-2的活性有明显的抑制作用。
结论:H.pylori感染通过激活p38MAPK/ATF-2信号转导通路上调COX-2启动子的转录活性，引起COX-2基因的表达增加，这可能是H.pylori感染诱发胃癌的重要机制之一。健脾解毒方通过调控p38MAPK/ATF-2信号转导通路，抑制H.pylori诱导的COX-2启动子的转录活性，降低COX-2的表达，是其防治H.pylori诱发胃癌的机制之一。
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