论文部分内容阅读
1研究目的1.1临床研究:探讨特发性肺纤维化急性加重期(AE-IPF)中医证候分布规律。1.2实验研究:探讨补肾活血法对肺纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号通路的影响。2方法2.1临床研究:搜集相关资料,制定AE-IPF中医证候调查表。以问卷形式,收集患者相关资料及中医四诊信息,并加以整理、分析,探讨AE-IPF患者的中医证型分布特点。2.2动物实验:SD大鼠随机分为空白组、模型组、泼尼松组、补肾活血胶囊低、中、高剂量组。5组大鼠均采用气管内滴注博莱霉素诱导肺纤维化模型,空白组气管内滴入等量生理盐水,造模成功后,分别予以对应药物灌胃,给药28天后留取标本。大鼠处死后,采用苏木精-伊红染色法(HE)及马松(Masson)三色染色法对肺组织予以病理学观察;用免疫组化技术(IHC)测定大鼠肺组织HYP及KL-6的表达,用酶联免疫分析法(ELISA)法检测大鼠血清中TGF-β1、TNF-α、LTB4,用蛋白免疫印迹法(Western Blot)测肺组织中Smad2/3、Smad7、p-Smad2/3蛋白的表达。3结果3.1临床研究:60例AE-IPF患者常见中医证型:痰湿瘀肺证兼肺肾气阳两虚证(18.33%),痰热瘀肺证兼肺肾气阳两虚证(13.33%),痰热瘀肺证兼肺气阴两虚证(10%),痰湿阻肺证兼肺肾气阳两虚证及痰热瘀肺证兼肺肾阴虚证(8.33%)。在所有的证型中兼瘀血证占63.33%,无兼证的为36.67%。3.2动物实验3.2.1 HE染色:空白组大鼠肺组织结构轮廓基本完整清晰,模型组可见肺泡结构破坏,局部炎性细胞浸润,肺泡间隔明显增厚,可见大量成纤维细胞增生、纤维组织。各治疗组大鼠肺组织病理学改变均有不同程度减轻,其中补肾活血胶囊高剂量组与泼尼松组减轻最明显,低、中剂量组次之。3.2.2 Masson染色:空白组大鼠肺泡间隔有少量蓝染胶原纤维分布。模型组大鼠可见染成深蓝色的胶原纤维沉积,主要存在于终末支气管壁、血管壁及肺泡间隔。各治疗组肺组织与模型组比较,颜色变浅,肺泡间隔厚度较窄,纤维化程度减轻,补肾活血胶囊高剂量组与泼尼松组改善最明显,胶原沉积最少。3.2.3 HYP、KL-6表达:与空白组相比较,余各组大鼠肺组织中HYP、KL-6表达均增高,差异有统计学意义(P<0.05),以模型组肺组织HYP、KL-6表达最高;与模型组相比较,各治疗组HYP、KL-6表达均有降低(P<0.05);各治疗组比较,以补肾活血胶囊高剂量组与泼尼松组降低最明显,差异有统计学意义(P<0.05)。3.2.4 TGF-β1、TNF-α、LTB4含量:与空白组相比较,余各组大鼠血清中TGF-β1、TNF-α、LTB4含量均显著增高,差异存在显著统计学意义(P<0.01),以模型组TGF-β1、TNF-α、LTB4含量最高;与模型组相比较,各治疗组大鼠血清TGF-β1、TNF-α、LTB4含量均有降低,且差异有显著统计学意义(P<0.01);各治疗组比较,补肾活血胶囊高剂量组与泼尼松组血清中TGF-β1、TNF-α、LTB4含量降低最明显,差异有显著统计学意义(P<0.01)。3.2.5 Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7表达:与空白组比较,余各组大鼠肺组织Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达量显著上升,Smad7蛋白表达量显著下降,且差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比较,各治疗组大鼠肺组织Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达量显著下降,Smad7显著上升,差异有统计学意义(P<0.05);其中补肾活血胶囊高剂量组与泼尼松组Smad2/3、p-Smad2/3降低与Smad7上升最明显,差异有统计学意义(P<0.05)。4结论4.1特发性肺纤维化急性加重期多表现为虚实夹杂证。4.2补肾活血胶囊可抑制胶原沉积,减少Ⅱ型肺泡上皮细胞增生,并通过减少TNF-α、LTB4含量,减轻肺部炎症、降低细胞毒性,达到减轻因博来霉素对大鼠肺组织损伤的目的。4.3补肾活血胶囊能降低TGF-β1血清含量、抑制肺组织Smad2/3与p-Smad2/3蛋白表达,促进Smad7蛋白表达,推测其可通过调控TGF-β1/Smads信号通路,从而达到抑制肺纤维化的目的。