【摘 要】
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目的研究MICAL-L2（molecule interacting with Cas L-like 2）对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）敏感性的影响及潜在机制。方法通过转录组测序分析MICAL-L2影响的信号分子,查询GEPIA数据库验证信号分子与MICAL-L2分子的相关性,通过q-PCR实验检测过表达或沉默MICAL-L2对结直肠癌细胞中TYMS（thymi
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目的研究MICAL-L2（molecule interacting with Cas L-like 2）对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）敏感性的影响及潜在机制。方法通过转录组测序分析MICAL-L2影响的信号分子,查询GEPIA数据库验证信号分子与MICAL-L2分子的相关性,通过q-PCR实验检测过表达或沉默MICAL-L2对结直肠癌细胞中TYMS（thymidylate synthase）、ANXA1（Annexin A1）mRNA水平的影响;在5-FU不同时间（0、24、48、72 h）和不同浓度（0、10、20、40、80μM）处理后,应用Western blot检测结直肠癌细胞系中MICAL-L2的蛋白表达水平;经不同浓度5-FU（0、2.5、5、10、20、40μM）处理稳定过表达MICAL-L2和对照组的结直肠癌细胞后,采用MTT法测定5-FU量效曲线并计算半数抑制浓度（IC50）;5-FU处理过表达或沉默MICAL-L2的结直肠癌细胞,采用MTT法检测结直肠癌细胞的细胞活力,评估MICAL-L2对结直肠癌细胞5-FU敏感性的影响,并通过流式细胞术检测MICAL-L2对5-FU诱导结直肠癌细胞凋亡的影响;应用q-PCR检测结直肠癌细胞过表达或沉默MICAL-L2联合5-FU对TYMS、ANXA1 mRNA表达水平的影响。结果1、RNA-seq结果显示,MICAL-L2的表达与“Response to drug”基因集密切相关,其中TYMS、ANXA1基因存在此基因集中,GEPIA数据库查询结果显示,MICAL-L2与TYMS、ANXA1的表达均呈正相关,同时,q-PCR结果显示,过表达或沉默MICAL-L2后,TYMS及ANXA1 mRNA水平增多或减少,这些结果提示MICAL-L2可能与结直肠癌5-FU敏感性有关。2、Western blot结果显示,5-FU处理结直肠癌细胞中MICAL-L2蛋白表达水平降低,并随着5-FU作用时间和浓度的增加而逐渐下降。3、MTT结果发现,过表达MICAL-L2的结直肠癌细胞活性明显高于对照组;且与对照组相比,过表达MICAL-L2的结直肠癌细胞5-FU的IC50值明显增加;经5-FU处理后,与对照组细胞相比,过表达MICAL-L2的结直肠癌细胞活力增加,相反,经5-FU处理后,与对照组细胞相比,沉默MICAL-L2的结直肠癌细胞活力降低。4、流式细胞术结果发现,经5-FU处理后,与对照组细胞相比,沉默MICAL-L2的结直肠癌凋亡比例显著增加。5、q-PCR结果显示,过表达或沉默MICAL-L2联合5-FU作用时,TYMS及ANXA1 mRNA水平明显下降或增多。结论MICAL-L2降低结直肠癌细胞对5-FU的化学敏感性,其机制可能是通过调控TYMS、ANXA1的表达而实现的。
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