泡桐叶中熊果酸的超声波提取与分离研究

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泡桐作为一种广泛分布的树种,其叶中含有多种生物活性物质,其中熊果酸具有保肝、抗炎、抑菌、抗肿瘤、增强免疫、降血糖血脂等一系列重要的药理功能,在医药保健、日用化工、功能食品等方面具有广泛应用。本文以泡桐叶为原料,研究了其中熊果酸的超声波提取、分离工艺。同时,建立了泡桐叶中熊果酸和齐墩果酸的HPLC分析方法,从泡桐种属、原料存储方法和采集时间等方面对泡桐叶原料选取进行了研究。在考察HPLC流动相体系和色谱柱对熊果酸、齐墩果酸分离测定影响的基础上,采用中心复合设计,以熊果酸、齐墩果酸的分离度和分析时间为响应值,对熊果酸和齐墩果酸HPLC分离测定的主要影响因素进行多重响应优化,建立了有效、快速的分离测定熊果酸和齐墩果酸的HPLC方法。结果表明,在210nm的检测波长下,用Shim-packODS-CLC(M)色谱柱,流动相为甲醇-磷酸水溶液体系,甲醇与水体积比为91.7:8.3,磷酸体积分数为0.05%,流速为0.6mL/min,柱温为21℃,齐墩果酸和熊果酸可以在23min内得到有效分离,分离度达到1.739。在此优化色谱条件下绘制齐墩果酸和熊果酸的标准曲线方程分别为:y=649520x–178493(r=0.9991)和y=502791x–294016(r=0.9993),线性范围分别为0.44~8.75μg和0.92~18.37μg。精密度、稳定性、重复性、加样回收率试验结果表明,该HPLC方法可用于分析测定泡桐叶中齐墩果酸和熊果酸的含量。为了选取适宜的泡桐叶原料,实现资源的充分有效利用,考察了不同泡桐种属、存储方法和采集时间下,泡桐叶中熊果酸和齐墩果酸的含量差异。结果表明,白花泡桐叶中熊果酸和齐墩果酸的含量最高,兰考泡桐叶次之,而毛泡桐叶中熊果酸和齐墩果酸的含量明显偏低;阴干后的泡桐叶比鲜叶和冷藏叶中熊果酸和齐墩果酸的含量稍高;从5月份开始,泡桐叶中熊果酸和齐墩果酸的含量逐月增加,在10月份达到最高。为探讨泡桐叶中熊果酸的超声波提取工艺,通过中心复合设计响应面法研究乙醇浓度(X1)、液固比(X2)、超声波提取时间(X3)对泡桐叶中熊果酸提取得率的影响。结果表明,各因素对熊果酸得率的影响顺序为乙醇浓度(X1)>超声波提取时间(X3)>液固比(X2);超声波提取泡桐叶中熊果酸的最优工艺条件为:乙醇浓度89%,液固比31:1(mL/g),超声时间37min;在此条件下,熊果酸得率为14.80mg/g,与预测值相近,二次回归模型预测性良好。用HPLC跟踪考察各分离方法的有效性和熊果酸损失情况,确立了适合泡桐叶中熊果酸分离的“正己烷洗→醇溶→酸沉淀”溶剂除杂工艺路线,所得熊果酸粗品的纯度达39.1%。以正己烷-乙酸乙酯-乙酸为淋洗剂,对熊果酸粗品进一步硅胶柱色谱分离。采用湿法装柱,干法上样,正己烷-乙酸乙酯-乙酸淋洗剂以8:1:0.08、6:1:0.08、4:1:0.04的体积配比梯度洗脱,泡桐叶中熊果酸可得到较好分离,所得熊果酸的纯度为87.4%,另外含有9.8%的齐墩果酸。乙醇重结晶3次,熊果酸的纯度达到93.6%,齐墩果酸的含量则降低至4.9%。泡桐叶中熊果酸的超声波提取与分离研究,为泡桐资源的综合开发利用奠定理论和应用基础,为活性物质熊果酸拓展更为广泛的植物来源。
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