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背景及目的:胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,是世界上死亡率位居第二位的恶性肿瘤。胃癌的发病具有广泛的地理分布特征,大约有2/3的胃癌病人位于发展中国家,其中中国的胃癌病人约占发展中国家胃癌病人数的42%,高危地区包括东亚、东欧和美国中部和南部的部分地区。在中国胃癌的发病率居各类肿瘤的首位。每年大约死于胃癌的人数有17万之多,基本上接近全部恶性肿瘤死亡人数的1/4。糖酵解酶ENO1在胃癌中呈高表达状态,并且与胃癌细胞的分化程度密切相关,ENO1在非小细胞肺癌中与肿瘤细胞的侵袭和转移存在密切相关。本篇研究通过将构建好的人烯醇化酶-α(enolase-α,ENO1)的慢病毒载体,转染人胃癌细胞株MKN45,探讨其体外增殖和侵袭迁移是否对人胃癌细胞产生影响。方法:以蛋白质印迹法(Western Blot)筛选出胃癌细胞系中高表达ENO1的细胞株MKN-45。运用构建好的慢病毒质粒PLKO.1-ENO1shRNA转染胃癌MKN-45细胞株,并以空质粒PLKO.1-scramble shRNA作为阴性对照组。以荧光定量PCR检测mRNA水平,蛋白质印迹法检测蛋白质水平,验证干扰效果,以MTT法检测细胞的增殖,平板克隆实验检测成瘤能力,关于细胞的侵袭迁移能力,使用划痕实验、transwell实验检测。结果:在高分化的胃癌细胞株MKN28上,ENO1表达相对较低,在低分化胃癌细胞株MKN45、SGC7901、BGC823中,ENO1表达相对较高。成功构建了稳定表达ENO1shRNA的人胃癌细胞稳定转染株MKN45-ENO1shRNA。与空载体 PLKO.1-scramble shRNA 组相比较,PLKO.1-ENO1shRNA 组感染细胞后ENO1 mRNA水平和蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT及平板克隆实验结果表明ENO1shRNA的敲除,其细胞的增殖和成瘤能力,与空载体组和空白对照组相比,明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。化疗药物敏感性结果说明与空载体组和空白对照组相比较,ENO1shRNA敲除组的化疗药物敏感性显著增高,对细胞产生的抑制率也明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。侵袭和迁移实验结果表明,ENO1shRNA敲除组,细胞的侵袭和迁移能力明显降低,与两个对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。ENO1基因沉默后,较大程度上抑制了胃癌细胞的增殖,对化疗药物的敏感性增加,并降低了体外胃癌细胞的侵袭迁移能力。结论:ENO1与胃癌的侵袭和迁移相关。ENO1表达水平的下降,有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,同时对化疗药物的敏感增加。