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由于国内对虎眼万年青的研究应用较晚,目前尚无其质量控制标准,课题欲通过对其化学成分的分析找出对已上市新药复方虎眼万年青胶囊中君药虎眼万年青的质量控制方法,系统地对研究虎眼万年青的化学成分进行研究,对日后的开发应用和质量控制标准的制定提供理论依据。对其两大类化学成分皂苷和多糖进行总体分析研究,对比它们在根、球茎、叶子等不同部位含量的差异,对虎眼万年青药材质量有个总体的把握,初步探讨扩大其药用部位的可能性,为日后研究应用提供理论基础。
在研究方法上课题采用HPLC和TLC法对虎眼万年青和其胶囊中的化学成分进行对比分析,找出能在胶囊中有明显表征虎眼万年青的化学成分,同时配合显微等方法,控制其质量;采用HPLC法和分光光度法对药效组分进行分析测定;采用HPLC法和TLC法研究药效组分的鉴定特征。此外应用系统的柱层析分离方法和紫外分光光度法,全面了解其化学成分和组成分布。
通过对原植物的鉴定确定课题所研究的品种为虎眼万年青Ornithogalum Caudatum Ait,组织特征鉴定结果显示大量的草酸钙针晶束可作药其胶囊中的显微鉴别特征。在对虎眼万年青指标性成分的寻找和分离鉴定时,经系统薄层分析锁定一亮蓝色荧光成分有显著的鉴别意义,具体为:虎眼万年青、复方万年青胶囊内容物和缺虎眼万年青阴性对照品各10g,10ml乙醇超声30min提取后过滤制得样品液,以氯仿:甲醇:水(2:2:4:1)下层为展开系统展开,1%A1C13乙醇显色后于365nm处荧光下观察,在Rf0.6处虎眼万年青及其复方制剂均显示亮蓝色荧光斑点,阴性对照在相应位置处无此斑点。
经过多次柱层析分离提纯得到目标蓝色荧光成分单体,经HPLC检测纯度高于90%。目标成分在8.45min时出峰,在胶囊中该峰峰形良好,分离度大于1.5,可定为复方虎眼万年青胶囊定性鉴别和含量测定的参考条件。
在对虎眼万年青化学成分的系统分离研究课题将药粉提取后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取,对有效部位综合运用硅胶、聚酰胺、凝胶柱等多种色谱法对其化学成分进行分离,得到6个合化物和一个可疑离子簇合物,分别为豆甾醇,谷甾醇,胡萝卜苷,熊果酸,另外两个尚在解析中。
最后课题对虎眼万年青的总多糖、总皂苷的分析测定:选用药典规定的葸酮—硫酸法及香草醛冰醋酸法分别对虎眼万年青的叶、球茎和根进行总多糖和总皂苷的含量测定,结果球茎做为主要的营养器官,其总多糖和总皂苷的含量均较高,选用球茎做为药用部为确有其依据,叶子中含量虽低于球茎,但也占有相当的比重,由于其巨大的产量,从总多糖和总皂苷来考虑,虎眼万年青的叶了或也可考虑开发为药用,如果可行,将可提供更多的药用资源,值得进一步深入研究。课题还对三个批次的胶囊也进行了测定,结果显示多糖和皂苷在胶囊中占了很大的比重,可以作为其质量控制的另一参考标准。