论文部分内容阅读
目的:肾阳虚在抑郁的发病机制中占有重要地位,本实验以脑源性神经营养因子（BDNF）及其受体酪氨酸激酶受体（Trk B）为中心,通过观察温针灸对肾阳虚抑郁模型大鼠的一般情况、体重、糖水消耗量、强迫游泳不动时间、旷场试验中央格停留时间及运动距离、血清中5-HT、DA、NE含量以及脑组织中BDNF、Trk B和p-GSK3β表达的影响,探讨温针灸对肾阳虚抑郁模型大鼠治疗的作用及机制。材料与方法:30只SD大鼠,雌雄各15只,250±50g,随机分为:正常组、模型组、抑制剂组、温针灸组、温针灸抑制剂组,每组各6只。除正常组外,其余各组采用氢化可的松注射结合21天慢性不可预见性温和刺激进行造模;抑制剂组和温针灸抑制剂组在取材前24小时给予Cyclotraxin B（Trk B抑制剂）按20mg/kg剂量腹腔注射2次,间隔90分钟;温针灸组和温针灸抑制剂组进行温针灸干预,选用大鼠“百会”、“印堂”、“命门”、“腰阳关”穴,“百会”、“印堂”平刺,“命门”、“腰阳关”斜刺,深度5mm,强度控制在大鼠忍受范围,将艾绒搓团捻于距离穴位2cm的针柄处,20min/次,日一次,连续治疗21d;采用糖水偏好实验、强迫游泳实验和旷场试验,检测造模方式是否成功以及温针灸法对肾阳虚型抑郁症模型大鼠行为学的影响;用免疫组织化学法检测各组大鼠前额叶BDNF、Trk B、p-GSK3β的表达情况;酶联免疫吸附测定法（Elisa）检测各组大鼠5-HT、DA、NE含量;蛋白质免疫印迹技术（Western-Blot）检测大鼠前额叶BDNF-Trk B-GSK3β信号通路BDNF、Trk B、p-GSK3β蛋白的表达情况。结果:1.一般情况造模前,各组大鼠一般情况良好;造模后,与正常组相比,模型组和抑制剂组大鼠表现为饮食减少、懒动嗜睡、皮毛粗糙无光泽、大便稀溏等。经温针灸干预后的温针灸组和温针灸抑制剂组上述症状有所改善。2.体重干预前,各组大鼠体重变化无统计学意义（P＞0.05）。干预后,与正常组比较,模型组、抑制剂组、温针灸组和温针灸抑制剂组的体重均降低（P＜0.05）;与模型组比,抑制剂组体重降低（P＜0.05）,温针灸组、温针灸抑制剂组体重有不同程度增加（P＜0.05）;与温针灸组相比,抑制剂组、温针灸抑制剂组体重明显降低（P＜0.05）。3.糖水偏好实验干预前,各组大鼠糖水消耗量无统计学意义（P＞0.05）。干预后,与正常组比,模型组、抑制剂组、温针灸组和温针灸抑制剂组的糖水消耗量均降低（P＜0.05）;与模型组比,抑制剂组糖水消耗量明显降低（P＜0.05）,温针灸组、温针灸抑制剂组糖水消耗量均增加（P＜0.05）;与温针灸组相比,抑制剂组、温针灸抑制剂组糖水消耗量明显降低（P＜0.05）。4.强迫游泳实验干预前,各组大鼠游泳不动时间无统计学意义（P＞0.05）。干预后,与正常组比较,模型组、抑制剂组和温针灸抑制剂组的游泳不动时间均延长（P＜0.05）,温针灸组游泳不动时间无变化（P＞0.05）;与模型组比,抑制剂组游泳不动时间明显延长（P＜0.05）,温针灸组、温针灸抑制剂组游泳不动时间均有一定程度缩短（P＜0.05）;与温针灸组相比,抑制剂组、温针灸抑制剂组游泳不动时间均明显延长（P＜0.05）。5.旷场试验干预前,各组大鼠10min内中央格停留时间无统计学意义（P＞0.05）。干预后,与正常组比较,模型组、抑制剂组、温针灸组和温针灸抑制剂组中央格停留时间均显著缩短（P＜0.05）;与模型组相比,抑制剂组中央格停留时间明显减少（P＜0.05）,温针灸组、温针灸抑制剂组中央格停留时间均增加（P＜0.05）;与温针灸组相比,抑制剂组、温针灸抑制剂组中央格停留时间均明显缩短（P＜0.05）。干预前,各组大鼠旷场运动距离无统计学意义（P＞0.05）。干预后,与正常组比较,模型组、抑制剂组、温针灸组和温针灸抑制剂组运动距离均显著缩短（P＜0.05）;与模型组相比,抑制剂组运动距离明显减少（P＜0.05）,温针灸组、温针灸抑制剂组运动距离均增加（P＜0.05）;与温针灸组相比,抑制剂组、温针灸抑制剂组运动距离均明显缩短（P＜0.05）。6.免疫组化结果显示干预后,免疫组织化学法结果显示:与正常组比,模型组、抑制剂组、温针灸组和温针灸抑制剂组的BDNF、Trk B、p-GSK3β表达均降低（P＜0.05）;与模型组相比,抑制剂组BDNF表达水平无明显变化,Trk B、p-GSK3β表达降低（P＜0.05）,温针灸组和温针灸抑制剂组BDNF、Trk B、p-GSK3β蛋白表达有不同程度上调（P＜0.05）;与温针灸组比较,抑制剂组BDNF、Trk B、p-GSK3β表达下调（P＜0.05）,温针灸抑制剂组BDNF表达水平无明显变化,Trk B、p-GSK3β表达下调（P＜0.05）。7.Elisa检测结果提示干预后,ELISA结果显示:与正常组比较,模型组、抑制剂组、温针灸组、温针灸抑制剂组的5-HT、DA、NE含量均降低（P＜0.05）;与模型组比,抑剂组的5-HT、DA、NE含量无明显差异（P＞0.05）,温针灸组、温针灸抑制剂组的5-HT、DA、NE含量均有一定程度的增加（P＜0.05）;与温针灸组相比,抑制剂组、温针灸抑制剂组的5-HT、DA、NE含量均降低（P＜0.05）。8.WB检测结果显示干预后,WB结果显示:与正常组比较,模型组、抑制剂组、温针灸组、温针灸抑制剂组的BDNF、Trk B、p-GSK3β表达均降低（P＜0.05）;与模型组相比,抑制剂组BDNF表达水平无明显变化,Trk B、p-GSK3β表达降低（P＜0.05）,温针灸组和温针灸抑制剂组BDNF、Trk B、p-GSK3β蛋白表达均上调（P＜0.05）;与温针灸组比较,抑制剂组BDNF、Trk B、p-GSK3β表达下调（P＜0.05）,温针灸抑制剂组BDNF表达水平无明显变化,Trk B、p-GSK3β表达下调（P＜0.05）。结论:1.本实验采用慢性不可预见性温和刺激结合氢化可的松成功建立肾阳虚抑郁大鼠模型,温针灸有效改善大鼠行为学表达,抑制剂组、温针灸抑制剂组大鼠行为学表达受抑制剂Cyclotraxin B影响而降低。2.温针灸可以激活肾阳虚抑郁模型大鼠前额叶BDNF-Trk B通路的表达,降低抑制剂Cyclotraxin B对Trk B的抑制作用。3.温针灸对肾阳虚抑郁模型大鼠抑郁的调节作用可能是通过激活BDNF-Trk B通路促进GSK3β磷酸化,进而调控GSK3β的表达以改善大鼠的抑郁情况。