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本文主要从以下几方面展开论述： 第一部分 p16对阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移作用的影响 目的：研究阿托伐他汀对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）增殖迁移及凋亡的作用，以及p16在其中发挥的作用。 方法：原代培养大鼠主动脉VSMCs并进行免疫荧光鉴定；以不同浓度阿托伐他汀（0、0.5、1.0、2.0μM）干预VSMCs，CCK-8检测阿托伐他汀对VSMCs增殖的作用；Transwell小室检测阿托伐他汀对VSMCs迁移的作用；Annexin-V/PI双染色法检测阿托伐他汀对VSMCs凋亡的作用；q-PCR及Western blot检测阿托伐他汀对p16、p53表达的影响；用短发夹RNA（shRNA）沉默p16基因，观察p16介导阿托伐他汀对VSMCs增殖迁移的影响。 结果：（1）与对照组相比，阿托伐他汀以浓度依赖性方式抑制VSMCs增殖迁移（P＜0.05）；（2）与对照组相比，阿托伐他汀以浓度依赖性方式促进VSMCs凋亡，并上调p53蛋白表达；（3）与对照组相比，阿托伐他汀以浓度和时间依赖性方式上调p16mRNA及蛋白表达（P＜0.05）；（4）沉默p16基因后，阿托伐他汀对VSMCs增殖迁移的抑制作用均被逆转（P＜0.05）。 结论：阿托伐他汀通过调控p16表达影响VSMCs增殖迁移及凋亡。 第二部分 DNA甲基化介导阿托伐他汀调控p16表达的机制研究 目的：研究DNA甲基化在阿托伐他汀调控p16表达中的作用及机制。 方法：以不同浓度阿托伐他汀（0、0.5、1.0、2.0μM）、5-氮杂胞苷(5-Azacytidine，AZA)（0、0.5、1.0μM）干预VSMCs，q-PCR及Western blot检测DNA甲基化转移酶（DNA methyltransferases，DNMTs）（DNMT1、DNMT3a、DNMT3b）及p16的表达，亚硫酸氢盐基因组测序法检测p16启动子区CpG岛甲基化水平；建立DNMT1过表达与沉默细胞模型，q-PCR及Western blot检测p16的表达。 结果：（1）与对照组相比，AZA及阿托伐他汀组DNMT1表达明显下调，而DNMT3a和DNMT3b表达无明显改变；（2）与对照组相比，AZA组p16mRNA及p16蛋白表达上调（P＜0.05）；（3）与对照组（20.0%）相比，AZA（10.9%）及阿托伐他汀（7.3%）组p16启动子区CpG岛甲基化水平（10.9%）明显降低；（4）与对照组相比，DNMT1过表达组p16mRNA水平及蛋白表达表达明显下调；相反，DNMT1沉默组p16mRNA水平及蛋白表达表达明显上调（P＜0.05）；（5）与对照组相比，阿托伐他汀升高p16mRNA水平，DNMT1过表达可逆转上述效应，而DNMT1沉默则进一步增强该作用（P＜0.05）。 结论：阿托伐他汀通过下调DNMT1表达，降低p16启动子区甲基化水平，进而调控p16表达。 第三部分 MAPK通路参与阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移的机制研究 目的：研究丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）通路对DNMT1及p16的表达，以及在阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移中的作用及机制。 方法：以不同浓度阿托伐他汀（0、0.5、1.0、2.0μM）干预VSMCs，Western blot检测JNK、ERK、p38-MAPK以及他们各自磷酸化蛋白的表达；阿托伐他汀（1.0μM）联合MAPKs抑制剂（p-JNK抑制剂SP600125、p-ERK抑制剂AZD6244及p-p38抑制剂SB203580）干预VSMCs，Western blot检测p-JNK、p-ERK、p-p38、DNMT1及p16的表达水平，CCK-8检测、Transwell小室检测VSMCs增殖迁移情况。 结果：（1）与对照组相比，阿托伐他汀组JNK、ERK、p38-MAPK蛋白水平无明显改变，而p-JNK、p-ERK、p-p38蛋白水平明显增加；（2）与单用阿托伐他汀组相比，阿托伐他汀联合p-JNK抑制剂/p-ERK抑制剂/p-p38抑制剂组均出现DNMT1表达上调及p16表达下调；（3）与单用阿托伐他汀组相比，阿托伐他汀联合p-JNK抑制剂/p-ERK抑制剂/p-p38抑制剂组均出现VSMCs增殖迁移增加（P＜0.05）。 结论：阿托伐他汀激活MAPKs通路，抑制DNMT1表达，促进p16表达，进而抑制细胞增殖迁移。 第四部分 阿托伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的影响 目的：研究阿托伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生及p16表达的影响。 方法：SD雄性大鼠分三组：（1）假手术（Sham）组（2）球囊损伤组（3）球囊损伤+阿托伐他汀组，HE染色观察血管壁形态及内膜增生情况，q-PCR及Western blot方法检测损伤的动脉组织中p16mRNA及蛋白表达情况，亚硫酸氢盐基因组测序法检测p16启动子区CpG岛甲基化水平。 结果：（1）Sham组颈总动脉壁各层结构完整清晰，未见新生内膜增生，中膜VSMCs排列整齐；球囊损伤组可见血管壁明显增厚，管腔狭窄，有大量新生内膜形成，其中可见增多的VSMCs；球囊损伤+阿托伐他汀组新生内膜增生明显减轻；（2）与sham组相比，球囊损伤组p16mRNA水平及蛋白表达明显下调；与球囊损伤组相比，球囊损伤+阿托伐他汀组p16mRNA水平及蛋白表达明显上调（P＜0.05）；（3）与sham组相比，球囊损伤组p16启动子区CpG岛甲基化水平升高；与球囊损伤组相比，球囊损伤+阿托伐他汀组p16启动子区CpG岛甲基化水平降低。 结论：阿托伐他汀能通过降低p16启动子区CpG岛甲基化水平促进p16表达，有效抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生。