福建名优菊花工厂化试管育苗关键技术研究

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本试验以福建名优菊花‘绿江南’、‘白云如罗’两个品种菊花为材料,进行工厂化育苗关键技术研究。试验首先采用茎段培养建立了‘绿江南’和‘白云如罗’2个菊花品种的高效再生与快繁体系,并同时采用无菌苗茎段建立了薄层培养系统;其后,采用ISSR技术进行试管苗的遗传稳定性分析;最后,分析菊花工厂化育苗经济效益,提出菊花工厂化育苗模式。主要研究结果如下:1茎段培养建立福建名优菊花再生与快繁体系①菊花无菌株系的建立。以‘绿江南’、‘白云如罗’带腋芽茎段为外植体,建立试管苗无菌株系。试验采用0.1%HgCl2对‘绿江南’菊花茎段进行消毒,比较不同消毒时间对菊花试管苗污染率和成活率的影响。试验结果表明:‘绿江南’菊花茎段最佳消毒处理为75%酒精消毒30s后用0.1%HgCl2消毒9min,污染率为1.1%,成活率达93.3%。②菊花茎段培养。本试验以生长健壮的‘绿江南’和‘白云如罗’菊花试管苗为材料,采用茎段培养建立再生体系。试验采用L9(3~4)正交试验设计,比较不同浓度的6-BA、NAA以及不同基本培养基(MS、1/2MS、1/4MS)对试管苗增殖的影响。试验结果表明:‘绿江南’茎段培养的最佳增殖培养基为MS+0.15mg/L6-BA+0.15mg/L NAA,增殖系数为6.48;‘白云如罗’茎段培养的最佳增殖培养基为MS+0.25mg/L6-BA+0.25mg/L NAA,增殖系数5.93。③菊花生根培养。以长势一致的‘绿江南’和‘白云如罗’两种菊花试管苗剪成1~2cm左右带叶片茎段,接种到生根培养基中,试验采用L9(3~4)正交试验设计,探讨不同基本培养基(MS、1/2MS、1/4MS)和不同浓度NAA、IBA对菊花试管苗生根的影响。试验结果表明:‘绿江南’的最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.3mg/L+IBA0.1mg/L,生根率91.6%;‘白云如罗’的最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+IBA0.3mg/L,生根率达100%。④试管苗移栽。以‘白云如罗’菊花试管苗为材料比较不同炼苗时间和基质对试管苗移栽成活率的影响。a)将经过生根的‘白云如罗’菊花试管苗移到自然环境条件下,比较炼苗1d、3d、5d对移栽成活率的影响。试验结果表明:炼苗3天后,试管苗的成活率最高,成活率达100%。b)将炼苗3d后的‘白云如罗’试管苗移栽到6种不同的基质中,比较不同基质对试管苗移栽成活率的影响,试验结果表明:最适的移栽基质为草炭土:蛭石:园土=1:1:1,移栽成活率为96.7%,且试管苗生长情况良好。⑤施肥处理对菊花移栽苗生长的影响。试验设计三个处理,比较花多多10号2000、3000、4000倍稀释液对菊花苗生长的影响,喷施4次后统计材料的生长情况。试验发现,用花多多10号2000倍稀释液进行喷施效果最好,植株叶片面积较大,叶片更多,株高最高。2福建名优菊花薄层培养高效再生与快繁体系的建立①不同取材部位对不定芽分化的影响。取生长健壮的‘绿江南’和‘白云如罗’菊花试管苗茎段上部、下部和叶柄分别横切成0.5~1mm的薄层接种于MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L的培养基中表面,比较不同取材部位对不定芽分化的影响。试验结果表明:取试管苗上部茎段进行薄层培养分化率最高,‘绿江南’的分化率为92.7%,‘白云如罗’的分化率为38.2%。②不同浓度TDZ、6-BA、NAA对菊花薄层培养不定芽分化的影响。a)将‘绿江南’和‘白云如罗’菊花试管苗上部茎段横切薄层接种于不同浓度的TDZ培养基中。试验结果表明:两个品种在TDZ浓度为0.1mg/L分化率和增殖系数均达到最大值,‘绿江南’的分化率为25.0%,增殖系数0.29;‘白云如罗’的分化率为25%,增殖系数0.30。b)比较不同浓度6-BA对两个品种菊花试管苗薄层培养分化率和增殖系数的影响。试验结果发现:‘绿江南’和‘白云如罗’两个菊花品种在MS+0.1mg/L NAA+2mg/L6-BA培养基中分化率和增殖系数均达到最大值。‘绿江南’分化率为95.8%,增殖系数6.69;‘白云如罗’分化率40.33%,增殖系数为1.05。c)将两个品种菊花试管苗在添加不同浓度的NAA培养基中进行薄层培养。探讨NAA浓度对薄层培养分化率和增殖系数的影响。试验结果表明:‘绿江南’在MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基中分化率达到最大值88.0%,增殖系数也达到最大值5.3~4;NAA浓度为0.1mg/L‘白云如罗’试管苗分化率和增殖系数均达到最大值,分别为37.8%和1.03,NAA浓度过高或过低,不定芽的分化程度均降低。经过比较分析认为‘绿江南’薄层培养的最佳增殖培养基为MS+2mg/L6-BA+0.1mg/L NAA,1个薄层的增殖系数为6.69,1株试管苗可切成40个薄层,其复合增殖系数267.6。‘白云如罗’薄层培养的最佳增殖培养基为MS+2mg/L6-BA+0.1mg/L NAA,1个薄层的增殖系数为1.05,1株试管苗可切成40个薄层,其复合增殖系数为42。3菊花试管苗不同继代次数遗传稳定性的ISSR分析提取‘绿江南’和‘白云如罗’两个品种0代、3代、6代、9代、12代、15代的基因组DNA,利用筛选出的12条引物进行ISSR扩增,扩增统计结果:‘绿江南’6个DNA模版利用12条引物共扩增出114个位点,‘白云如罗’6个DNA模版利用12条引物共扩增出104个位点。数据分析表明:两个品种的前三代试管苗都基本保持稳定,经过15次继代后,变异率分别为7.8%和7.3%。因此‘绿江南’和‘白云如罗’两个品种的试管苗经过短期的继代离体培养并不会发生变异,经过多次继代后,才会发生一定变异。在工厂化育苗过程中,讲究的是快繁,继代次数较少,所以本试验建立的高效、短期稳定的再生与快繁体系,适合工厂化育苗的需求,有较好的应用前景。4菊花工厂化育苗模式与经济效益分析建立了福建名优菊花的工厂化育苗模式并对经济效益进行分析。本试验建立的工厂化育苗模式为:将菊花茎段经过0.1%HgCl2消毒9min后接种于MS培养基中,建立无菌株系成活率93.3%;通过横切薄层培养进行增殖培养,两个品种的最佳培养基均为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L,‘绿江南’1个薄层的增殖系数6.69,1株试管苗可切40个薄层,其复合增殖系数为267.6。每50天继代一次,一年可继代7代,以此为参数,离体培养时污染率控制在5%以下,按试管苗理论计算公式计算得‘绿江南’1株试管苗1年可增殖9.9×1016株,‘白云如罗’1个薄层的增殖系数1.05,1株试管苗可切40个薄层,其复合增殖系数为42,1株试管苗1年可增殖2.3×1011株试管苗。‘绿江南’在1/2MS+NAA0.3mg/L+IBA0.1mg/L培养基中进行生根,生根率91.6%,‘白云如罗’的生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+IBA0.3mg/L,生根率100%;将经过生根的试管苗炼苗3d后移栽到草炭土:蛭石:园土=1:1:1基质中,移栽成活达96.7%;在试管苗成活后施用‘花多多10号’稀释2000倍液进行施肥处理。经过计算每株菊花试管苗的生产成本约为0.33元,市场上6~7cm的菊花扦插苗售价约为0.6元左右,用此方法进行菊花试管苗生产具有广阔的市场前景和经济效益。
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