乙基多杀菌素作为目前生物源农药家族中最为畅销的杀虫剂成员之一,并通过AA级绿色食品标准,广泛应用于农作物害虫综合治理,以及储藏物害虫防治和动物寄生虫防治。随着多杀菌素毒性事件的涌现,使人们对于其衍生产品乙基多杀菌素的安全性产生了怀疑。根据美国环境保护署（EPA）给出的健康风险评价,主要集中在多种动物活体模型且均表现较为安全,未见关于体外细胞水平的毒性风险评估。本研究主要通过选用人源肝组织细胞（HepG2）作为体外细胞模型,评估乙基多杀菌素对人源肝细胞的体外毒性。采用MTT实验和平板细胞克隆形成实验,发现乙基多杀菌素可降低细胞存活率和抑制细胞的增殖。并采用碱性单细胞凝胶电泳实验和γ H2AX免疫荧光实验证实了乙基多杀菌素可诱导细胞DNA发生损伤。同时观察到线粒体内活性氧自由基发生了积累,导致细胞发生氧化损伤并诱导8-羟基脱氧鸟苷的产生。检测到DNA损伤修复关键蛋白PARP发生切割,引起DNA修复受阻或不能修复。而PARP的切割主要来自于凋亡过程中Caspase-3蛋白的活化,这也预示着损伤的细胞可能通过凋亡途径完成修复。采用Hoechst 33258染色法、流式Annexin-FITC/PI双染法证实乙基多杀菌素可以诱导细胞发生凋亡。研究还发现线粒体通透性转换孔开放、线粒体膜电位降低、细胞色素C释放、Caspase-3/9活化、Bcl-2/Bax值的降低都进一步证实了乙基多杀菌素可诱导线粒体信号转导途径的细胞凋亡。通过MDC染色、透射电镜观察和Ad-mCherry-GFP-LC3B转染实验证实了乙基多杀菌素可以诱导细胞发生自噬。通过对自噬标志性蛋白LC3、p62、Beclin-1表达情况的检测,进一步证实自噬的发生。通过Lyso-Tracker Red和Mito-Tracker Green荧光双标法检测到线粒体被自噬溶酶体所包裹,同时检测到细胞内ATP含量降低表明发生了线粒体自噬。最终诱导AMPK蛋白的磷酸化水平增强,mTOR蛋白的磷酸化水平和mTOR下游效应蛋白p70s6k的磷酸化水平降低。以上结果说明了乙基多杀菌素诱导细胞自噬并激活AMPK/mTOR信号通路。