急性髓系白血病（Acute Myeloid leukemia,AML）是一种常见的白血病,也是成年人中发病率最高的白血病,总体预后非常不理想。目前,AML治疗以化疗为主,最常用的是使用阿糖胞苷和柔红霉素联合治疗。然而,由于不同的AML患者的发病原因存在差异,这导致这种疗法并不适用于所有病人,许多病人在治疗后产生了复发和耐药性。同时,由于白血病多发于老年人,而老年人体质较差,很难耐受化疗所产生的副作用。因此,需要寻找针对白血病的特异性更高,毒性更低的药物。近年来,针对AML表观遗传机制的药物越来越受到重视。已经有多种针对表观遗传机制的药物被用于治疗AML,这些药物产生了一定疗效,但仍存在一定缺点,因此研究AML的表观遗传调控仍有很大进步空间。MOF（Males Absent on the First,MOF）又称 KAT8 或 MYST1,是一种组蛋白乙酰转移酶,在多种肿瘤的发生发展中都具有重要作用,然而,其在急性髓系白血病（AML）中的作用仍然知之甚少,我们以前的研究表明,高表达MOF的AML细胞对多种药物的耐药性均有所提高,但由于MOF在造血过程中起着不可或缺的重要作用,因此难以使用小分子化合物直接靶向干预,因此,阐明MOF在AML中的作用机制,并由此寻找可能的治疗方式可能是治疗AML的有效策略。研究目的:以U937和HL-60两种AML细胞系作为研究对象,通过慢病毒转染改变MOF的表达水平,观察MOF变化对AML细胞系的影响。寻找与MOF表达相关的在AML中起重要作用的蛋白,并验证MOF与该蛋白的关系,从而找到MOF在AML中的作用机制。研究方法:1)使用CCK8及流式细胞术检测MOF表达变化对AML细胞增殖速度、凋亡和细胞周期的影响;2)筛选多种与MOF表达量相关性高,且在AML中起重要作用的蛋白,并通过Western Blot与RT-qPCR检测MOF对DNMT3A表达水平的影响;3)免疫共沉淀检测MOF与DNMT3A的结合;4)Western Blot检测MOF对DNMT3A的乙酰化及泛素化水平的影响;5)使用蛋白质合成抑制剂处理细胞检测MOF对DNMT3A的降解速率的影响;6)甲基化芯片检测在AML细胞中过表达MOF对DNA甲基化的影响;7)验证不同药物对过表达MOF的AML细胞的影响,并验证影响DNMT3A能否恢复过表达MOF导致的耐药性变化。实验结果:1)MOF表达过低会导致AML细胞凋亡,过表达MOF则会提高AML细胞的增殖速度。2)MOF与DNMT3A蛋白表达水平呈负相关,但对DNMT3A的RNA水平无影响。3)MOF能够与DNMT3A结合。4)OF能够促进DNMT3A乙酰化及泛素化。5)OF通过乙酰化DNMT3A,招募了泛素化酶UHRF1对其进行泛素化并促进其降解。6)过表达MOF后的AML细胞中DNA甲基化水平与含有DNMT3A功能缺失突变的AML细胞类似。7)过表达MOF后,AML细胞对多种药物的耐药性增加,但对于mTOR抑制剂雷帕霉素其耐药性下降,而在过表达MOF的AML细胞中过表达DNMT3A可以恢复这种表型。结论:MOF在调节AML的发生发展中起着重要作用,高表达的MOF会使AML细胞对多种药物耐药。但同时,也使其对特殊的药物敏感。将MOF作为肿瘤标志物之一,阻断MOF与DNMT3A的相互作用,对于AML的个性化治疗是极具前景的手段。