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目的:
建立用HPLC法检测两面针药材中有效成分氯化两面针碱的含量测定方法,并和《中国药典》采用的TLCS法进行比较研究。测定两面针不同生育期和不同药用部位中氯化两面针碱、重金属和微量元素的含量,找出在不同生育期中氯化两面针碱的积累动态规律,为综合利用两面针药用资源以及明确两面针最佳采收期提供科学依据。
方法:
在两面针主产区南宁市高峰林场内采集两面针不同生育期样品,分别按照《中国药典》2005年版一部采用的TLCS法和HPLC法对氯化两面针碱进行测定,TLCS法色谱条件:自制硅胶G薄层板;展开剂:苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(20∶5∶3∶1∶0.12);参比波长:210nm;测定波长:300nm;狭缝0.4×0.4;SX=3;扫描方式:双波长反射锯齿扫描。HPLC法的色谱条件:色谱柱:Lichro sphere-C18(4.6mm×250mm),5μm;流动相:乙腈-缓冲液(0.2%三乙胺+0.2%磷酸)=30∶70;柱温:35℃;流速:1.0ml/min;检测波长:272nm。同时,采用原子荧光光谱法、原子吸收分光光谱法及电感耦合等离子体发射光谱法对其微量元素和重金属进行测定。
结果:
两面针中氯化两面针碱的含量随着月份的变化而变化,其变化呈一定的规律性。
不同部位的两面针中,根、茎,叶、根皮和茎皮的含量有较大差异,其中两面针的根皮含量最高,根次之,茎最少,而叶则检测不到氯化两面针碱。
两面针中微量元素随着生育期的不同而变化,但无规律性,其中Fe含量最高,Se含量最低。
两面针中重金属含量较低,均符合国家标准。
结论:
采用HPLC法测定两面针药材中氯化两面针碱,该方法灵敏度高,专属性强,重现性好,能准确快速进行测定。相比之下,现今《中国药典》所采用的TLCS法,其灵敏度较低,专属性较差,重现性较差,结果误差较大。
以两面针药材中氯化两面针碱含量为检测指标,用两种方法考查了两面针不同生育期中氯化两面针碱含量的变化规律,初步提出两面针药材合理的采收期应在12月。
比较了两面针不同部位氯化两面针碱的含量,结果表明两面针根皮中氯化两面针碱含量最高,根次之,茎最少,而叶则检测不到氯化两面针碱。其含量高低顺序依次为:根皮>根>茎皮>粗茎>小茎>叶。
两面针中微量元素丰富,重金属含量符合国家标准,这为建立规范化生产基地提供了实验依据。