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【背景】
基于细胞增殖和凋亡平衡失控与原发性肝癌的发生发展密切相关，在对α-硫辛酸(α-LA)处理前后的肝癌细胞进行全转录组分析的基础上，以BAX、BAK与肝癌细胞凋亡明确相关的差异表达基因为切入点进行相关研究。
【目的】
检测α-LA对肝癌细胞凋亡的诱导作用，初步探讨其分子作用机制，为α-LA应用于临床治疗原发性肝癌提供理论基础。
【方法】
1.用2.0mmol/Lα-LA处理肝癌细胞BEL-7402和HepG2各24h，然后采用AnnexinV-FITC/PI双染色法检测α-LA对肝癌细胞凋亡的影响。
2.采用RNA-Seq技术对2.0mmol/Lα-LA处理前后的BEL-7402细胞mRNA水平进行差异表达分析，筛选对α-LA敏感的凋亡基因。
3.采用qPCR、Westernblot技术检测2.0mmol/Lα-LA处理BEL-7402和HepG2细胞24h后，BAX、BAK及其下游分子CYCS、CASP3的mRNA和蛋白表达水平的变化。
4.沉默BAX或BAK，然后用qPCR、Westernblot技术验证转染效果及CYCS、CASP3的表达变化，再采用AnnexinV-FITC/PI双染色法检测沉默BAX或BAK后BEL-7402和HepG2细胞凋亡的变化。
5.沉默BAX或BAK后，qPCR、Westernblot检测α-LA对CYCS、CASP3表达的影响，并用AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡的变化。
6.过表达BAX或BAK，qPCR、Westernblot检测其表达效果及CYCS、CASP3的表达变化，并用流式细胞仪检测过表达BAX或BAK后肝癌细胞凋亡的影响。
7.过表达BAX或BAK后，qPCR、Westernblot检测α-LA对肝癌细胞CYCS、CASP3mRNA及蛋白水平表达的影响。并用AnnexinV-FITC/PI双染色法检测过表达BAX或BAK后，α-LA对细胞凋亡的影响。
【结果】
1.2.0mmol/Lα-LA显著促进BEL-7402和HepG2细胞凋亡。
2.2.0mmol/Lα-LA处理BEL-7402细胞后，转录组分析表明BAX、BAK基因mRNA表达显著增加。
3.2.0mmol/Lα-LA处理BEL-7402和HepG2细胞后，BAX、BAK和线粒体凋亡途径核心分子CYCS以及细胞凋亡关键效应分子CASP3的mRNA和蛋白表达水平显著上调。
4.沉默BAX或BAK后，BEL-7402和HepG2细胞CYCS、CASP3的mRNA及蛋白表达水平下调，细胞凋亡减少。
5.沉默BAX或BAK后，α-LA诱导BEL-7402和HepG2细胞CYCS、CASP3表达，细胞凋亡显著增加。
6.过表达BAX或BAK，BEL-7402和HepG2细胞CYCS、CASP3的mRNA及蛋白表达水平上调，细胞凋亡显著增加。
7.过表达BAX或BAK后，α-LA提高BEL-7402和HepG2细胞CYCS、CASP3的mRNA及蛋白表达水平，细胞凋亡显著增加。
【结论】
1.2.0mmol/Lα-LA处理BEL-7402和HepG2细胞24h后，细胞凋亡显著增加。
2.2.0mmol/Lα-LA显著上调BEL-7402和HepG2细胞中的BAX、BAK、CYCS和CASP3基因的表达。
3.沉默BAX或BAK，BEL-7402和HepG2细胞中CYCS、CASP3表达下调，细胞凋亡减少，加α-LA后，α-LA拮抗沉默效应，促进肝癌细胞凋亡。
4.过表达BAX或BAK，BEL-7402和HepG2细胞中CYCS、CASP3表达上调，细胞凋亡增加，加α-LA后，α-LA协同过表达质粒促进肝癌细胞凋亡。
综上所述，α-硫辛酸通过诱导BAX、BAK表达促进肝癌细胞凋亡。
基于细胞增殖和凋亡平衡失控与原发性肝癌的发生发展密切相关，在对α-硫辛酸(α-LA)处理前后的肝癌细胞进行全转录组分析的基础上，以BAX、BAK与肝癌细胞凋亡明确相关的差异表达基因为切入点进行相关研究。
【目的】
检测α-LA对肝癌细胞凋亡的诱导作用，初步探讨其分子作用机制，为α-LA应用于临床治疗原发性肝癌提供理论基础。
【方法】
1.用2.0mmol/Lα-LA处理肝癌细胞BEL-7402和HepG2各24h，然后采用AnnexinV-FITC/PI双染色法检测α-LA对肝癌细胞凋亡的影响。
2.采用RNA-Seq技术对2.0mmol/Lα-LA处理前后的BEL-7402细胞mRNA水平进行差异表达分析，筛选对α-LA敏感的凋亡基因。
3.采用qPCR、Westernblot技术检测2.0mmol/Lα-LA处理BEL-7402和HepG2细胞24h后，BAX、BAK及其下游分子CYCS、CASP3的mRNA和蛋白表达水平的变化。
4.沉默BAX或BAK，然后用qPCR、Westernblot技术验证转染效果及CYCS、CASP3的表达变化，再采用AnnexinV-FITC/PI双染色法检测沉默BAX或BAK后BEL-7402和HepG2细胞凋亡的变化。
5.沉默BAX或BAK后，qPCR、Westernblot检测α-LA对CYCS、CASP3表达的影响，并用AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡的变化。
6.过表达BAX或BAK，qPCR、Westernblot检测其表达效果及CYCS、CASP3的表达变化，并用流式细胞仪检测过表达BAX或BAK后肝癌细胞凋亡的影响。
7.过表达BAX或BAK后，qPCR、Westernblot检测α-LA对肝癌细胞CYCS、CASP3mRNA及蛋白水平表达的影响。并用AnnexinV-FITC/PI双染色法检测过表达BAX或BAK后，α-LA对细胞凋亡的影响。
【结果】
1.2.0mmol/Lα-LA显著促进BEL-7402和HepG2细胞凋亡。
2.2.0mmol/Lα-LA处理BEL-7402细胞后，转录组分析表明BAX、BAK基因mRNA表达显著增加。
3.2.0mmol/Lα-LA处理BEL-7402和HepG2细胞后，BAX、BAK和线粒体凋亡途径核心分子CYCS以及细胞凋亡关键效应分子CASP3的mRNA和蛋白表达水平显著上调。
4.沉默BAX或BAK后，BEL-7402和HepG2细胞CYCS、CASP3的mRNA及蛋白表达水平下调，细胞凋亡减少。
5.沉默BAX或BAK后，α-LA诱导BEL-7402和HepG2细胞CYCS、CASP3表达，细胞凋亡显著增加。
6.过表达BAX或BAK，BEL-7402和HepG2细胞CYCS、CASP3的mRNA及蛋白表达水平上调，细胞凋亡显著增加。
7.过表达BAX或BAK后，α-LA提高BEL-7402和HepG2细胞CYCS、CASP3的mRNA及蛋白表达水平，细胞凋亡显著增加。
【结论】
1.2.0mmol/Lα-LA处理BEL-7402和HepG2细胞24h后，细胞凋亡显著增加。
2.2.0mmol/Lα-LA显著上调BEL-7402和HepG2细胞中的BAX、BAK、CYCS和CASP3基因的表达。
3.沉默BAX或BAK，BEL-7402和HepG2细胞中CYCS、CASP3表达下调，细胞凋亡减少，加α-LA后，α-LA拮抗沉默效应，促进肝癌细胞凋亡。
4.过表达BAX或BAK，BEL-7402和HepG2细胞中CYCS、CASP3表达上调，细胞凋亡增加，加α-LA后，α-LA协同过表达质粒促进肝癌细胞凋亡。
综上所述，α-硫辛酸通过诱导BAX、BAK表达促进肝癌细胞凋亡。