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肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae，S.pn）侵袭宿主细胞是导致机体发病的重要环节，但启动侵袭的机制尚不十分清楚。本文通过体外实验，研究S.pn是否可通过肺Ⅱ型上皮细胞(A549)信号转导途径触发微丝肌动蛋白（filamentous actin，F-actin）细胞骨架重排，进而导致S.pn对A549细胞的侵袭。方法：采用F-actin特异性FITC-phalloidin荧光染料，观察S.pn作用A549细胞前后的F-actin细胞骨架重排情况，依照重排百分率得分标准以（％）表示；用F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D预处理A549细胞，观察S.pn对A549细胞的侵袭率；分别使用PLC、TPK、Ca2+信号转导抑制剂U73122、Genistein、Datrolene处理因素预处理A549细胞，观察其与F-actin细胞骨架重排百分率间是否存在剂量依赖关系；用胰酶处理S.pn得到表面蛋白受破坏的S.pn，限制性C+Y培养液中胆碱成分被20μg/ml乙醇 重庆医科大学硕士研究生论文 胺替代后得到不含胆碱的S巾n菌体，以观察上述两种 SFn亚组分对F吃ctin细胞骨架重排的影响；用Fura＜AM 荧光探针负载 A刊。细胞后测定 S巾n粘附 A刊。细胞 3 0， 60，90min的胞内［Ca卜］；浓度。结果：Son作用 A讣。细 胞后，经FITC－phalloidin 荧光染色，F－actin细胞骨架 呈块状、丝状聚集，F吃ctin细胞骨架重排抑制剂细胞松 弛素D可明显降低S｝n 对A刊。细胞的侵袭率，在其浓 度为0．25pg／ml时，未得到可测的细菌数；PLC、TPK、 Ca卜三种信号转导途径抑制剂抑制可部分抑制A刊。细胞 F《ctin 细胞骨架重排，三种抑制剂与F心ctin 细胞骨架 重排百分率间存在量效关系，其相关系数分别为： rpLc。－0．88（P＜0．05）： rTpK二－0．91（P＜0．05）： re。2＋二－0．86 (P＜0刀5人S｝n胆碱成分及其表面蛋白不影响F心ctin 细胞骨架重排的发生；SFn粘附A川。细胞30，60，90min 后的胞内［Ca卜］；高于对照(187．4土 17．3nmol八人 并达到 饱和，分别 为487．5士38二，548．2士35＊，557．2士 47．5 nmol八。结论：上述结果提示 SFn可通过 PLC、TPK、 Cay细胞信号转导途径触发A刊。细胞F叼ctin细胞骨架重 排，进而导致S｝n侵袭A讣。细胞。