hsa_circ_0006154在衰老滋养细胞HTR-8/svneo中的作用及机制研究

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第一部分高低龄孕妇胎盘组织中差异表达的circRNAhsa_circ_0006154
  目的:环状RNAs(circRNAs)与各种疾病的发展有关。然而,胎盘circRNA在晚期母亲年龄中的作用尚不清楚。
  方法:采用高通量测序法检测3名高龄女性(NA)和3名年轻女性(NY)胎盘组织中的circRNA表达。使用共GO分析和KEGG分析来预测circRNA的功能。构建circRNA-miRNA-mRNA共表达网络筛选关键circRNA。通过RT-PCR验证筛选circRNA的表达。
  结果:从高龄和低龄胎盘中筛选出136个差异表的circRNA,其中,有75个上调的circRNA和61个下调的circRNA。在功能富集分析中筛选出3条与衰老相关的信号通路。共表达网络结构显示,hsa_circ_0006154和hsa_circ_0002462具有最多的miRNA结合位点。对共表达网络筛选的circRNA进行RT-PCR验证,结果显示,hsa_circ_0006154的表达具有统计学差异。
  结论:高低龄胎盘组织中共有136个circRNA差异表达。其中,Hsa_circ_0006154表达具有统计学差异,且具有最多的miRNA结合位点,可能是高低龄胎盘组织中的一个关键circRNA。
  第二部分hsa_circ_0006154对滋养细胞功能及其作用机制的研究
  目的:研究hsa_circ_0006154对滋养细胞(HTR-8/svneo)功能的影响及其作用机制。
  方法:首先,建立衰老模型;其次,检测衰老模型中hsa_circ_0006154的表达;然后,敲低hsa_circ_0006154,观察滋养细胞(HTR-8/svneo)的功能;最后,利用TGF-β1抑制剂观察hsa_circ_0006154调控细胞功能的可能信号通路。
  结果:H2O2诱导滋养细胞(HTR-8/svneo)衰老结果显示,当H2O2浓度为300μM时,衰老细胞的比例最大,且细胞的活性为70%左右。加入H2O2后,滋养细胞(HTR-8/svneo)的增殖能力降低,凋亡能力增强,构建hsa_circ_0006154的siRNA,siRNA转染后检测对滋养细胞(HTR-8/svneo)功能的影响发现,滋养细胞(HTR-8/svneo)的增殖能力增强,凋亡能力减弱。加入TGFβ1抑制剂后结果显示,加入hsa_circ_0006154的siRNA组滋养细胞(HTR-8/svneo)的增殖能力降低,凋亡能力增强。
  结论:hsa_circ_0006154是高低龄胎盘中的一个关键circRNA,对滋养细胞(HTR-8/svneo)的增殖和凋亡能力有影响。
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