[研究背景与目的]由于肿瘤血管的结构和功能缺陷,使其具有高通透性和渗漏性的特点。传统的抗血管生成方法旨在抑制血管新生以达到“饿死”肿瘤的目的,但是长期临床用药结果并不尽如人意,过度削减未成熟血管会导致肿瘤耐药性增加、促进肿瘤转移等。缺血性疾病在血流重建的过程会因血管灌注功能不足导致血流减少、组织坏死等。血管正常化策略可使处于病理状态下的异常血管向正常血管的表型与特性转变。因此,血管正常化是两种疾病共同的治疗策略。Ang/Tie2信号轴对于血管发育和成熟至关重要,且Ang-2在肿瘤和缺血性疾病中均异常高表达。在中医临床上,肿瘤和缺血性疾病均属于血瘀证范畴,活血化瘀药能够治疗血瘀证候,丹参作为活血化瘀要药,在临床上被广泛运用于治疗肿瘤和缺血性疾病。本研究从血管正常化的角度探索丹参治疗肿瘤和缺血性疾病的药效物质基础和潜在作用机制,为临床使用丹参治疗肿瘤和缺血性疾病提供依据和支撑。[研究内容与结果]本研究通过构建肿瘤合并下肢缺血模型（以下简称合并模型）,评价丹参提取物对于缺血下肢和肿瘤血管正常化的影响。通过激光多普勒扫描、缺氧因子免疫组化、天狼猩红染色、H＆E以及抗肌萎缩蛋白免疫荧光进行检测,发现丹参提取物可以促进缺血下肢血流恢复,改善胶原沉积,减轻下肢腓肠肌缺氧程度,改善肌肉的质量。通过测量肿瘤体积、免疫荧光和扫描电镜检测肿瘤血管灌注、渗漏、周细胞覆盖、基底膜连接、血管壁完整性,发现丹参提取物可以抑制肿瘤的发展,减少血管渗漏,增强血管灌注,完善肿瘤血管的结构与功能。ELISA检测结果显示丹参提取物能够促进合并模型小鼠血清中Ang-1的表达,对Ang-2具有抑制作用。Western Blot结果表明,丹参提取物对肿瘤和腓肠肌组织中Ang-2下游相关蛋白产生影响。通过液质联用、分子对接、MST和qRT-PCR实验确定丹酚酸A和丹参酮Ⅰ可能为丹参提取物发挥作用的重要物质基础。通过ELISA实验、渗漏实验、小管形成、Western Blot、免疫荧光等体外实验,发现丹参酮Ⅰ和丹酚酸A虽不影响HUVEC小管形成能力,但能够影响HUVEC细胞上清中Ang-2、Ang-1蛋白的分泌,降低内皮细胞的渗透性,促进内皮细胞紧密连接蛋白的表达。通过Chou-Talalay模型考察丹参酮Ⅰ和丹酚酸A的协同作用,发现当丹参酮Ⅰ和丹酚酸A浓度比为1:2时,具有较强的协同效应。体内动物实验按照相同的比例给药之后用之前同样的方法对下肢腓肠肌和肿瘤组织进行检测,发现丹参酮Ⅰ和丹酚酸A能够促进肿瘤和下肢缺血组织血管正常化。[结论与意义]基于上述结果,我们发现丹参提取物具有促进合并模型小鼠缺血下肢和肿瘤血管正常化的作用。其中丹酚酸A和丹参酮Ⅰ可能发挥主要作用,两种成分分别作用于Ang-2/Tie-2信号轴的不同环节,但在促进血管正常化过程中发挥协同作用。主要表现在均可以抑制Ang-2的分泌,提高Ang-1的表达水平,增强血管灌注,减少血管渗漏,改善肿瘤血管结构与功能。与传统的促进或抑制血管生成的治法不同,本研究利用中医活血化瘀的治法,选取临床上用于治疗肿瘤和缺血性疾病应用频率较高的代表药丹参,从血管正常化的角度探索其治疗肿瘤和缺血性疾病的药效物质基础和潜在作用机制,为临床使用丹参治疗肿瘤和缺血性疾病提供依据和支撑。