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目的:
评价姜酚胶丸治疗老年类风湿关节炎(RA)的临床疗效,并在此基础上构建胶原诱导性关节炎大鼠模型(CIA),探讨6-姜酚对Th17/IL-17通路的调控机制,进一步分析6-姜酚在RA治疗中的作用。
方法:
临床研究:将60例RA患者随机分为治疗组与对照组,治疗组予姜酚胶丸联合来氟米特片、对照组单纯予来氟米特片治疗,必要时酌情加用美洛昔康片,用药12周后通过治疗前后组内对比及治疗后组间对比,观察两组患者症状体征、炎性指标C反应蛋白(CRP)及血沉(ESR)、28个关节疾病活动度评分(DAS28)的变化情况。
实验研究:将90只Wistar大鼠随机分为6-姜酚高、中、低剂量组、来氟米特组、模型组及空白组,每组15只,除空白组外,其余各组分别建立CIA大鼠模型。造模第7天开始灌胃给药,空白组及模型组灌服等容积生理盐水,其余各组分别灌服高、中、低剂量6-姜酚及来氟米特,时间为28天。分别于给药前及给药后第7、14、21、28天计算大鼠关节肿胀率及关节炎指数(AI),并于给药后观察各组大鼠关节滑膜及软骨病理学改变。灌药第28天处死大鼠,取双后肢关节滑膜及软骨组织用于病理检测;取外周血用于流式细胞术(FCM)检测辅助性T细胞17(Th17)表达;分离血清用于酶联免疫吸附法(ELISA)检测转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)及γ-干扰素(IFN-γ)表达;取脾脏组织用于实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测IL-17、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)的基因表达以及蛋白质印迹法(WB)检测RORγt的蛋白表达。最后对结果进行统计分析。
结果:
临床研究:与治疗前比较,姜酚胶丸联合来氟米特片与单纯应用来氟米特片后老年RA患者症状体征、炎性指标、DAS28评分均有不同程度改善(P均<0.05);治疗后比较,两药联合效果更佳(P<0.05)。
实验研究:①与空白组比较,模型组大鼠足趾关节肿胀率及AI评分明显升高(P<0.05);与模型组比较,6-姜酚中、高剂量组及来氟米特组大鼠足趾关节肿胀率及AI评分明显降低(P<0.05);6-姜酚低剂量组治疗效果不明显,与模型组比较无差异(P>0.05)。②与空白组比较,模型组大鼠关节滑膜衬里细胞明显增厚,滑膜内可见大量炎细胞浸润,滑膜组织增生明显,滑膜血管增多,血管壁及周围炎细胞浸润明显,形成血管翳,软骨组织增生,骨小梁结构变薄,部分软骨钙化、坏死致骨质破坏;与模型组比较,6-姜酚中、高剂量组及来氟米特组大鼠关节滑膜衬里细胞明显变薄,滑膜内炎性细胞浸润及新生血管明显减少,滑膜增生明显改善,滑膜组织接近正常,软骨组织可见轻度增生、细胞排列稍紊乱,偶有软骨钙化及骨侵蚀,骨小梁结构无明显破坏。6-姜酚低剂量组关节滑膜及软骨病理改善程度与模型组相似。③与空白组比较,模型组大鼠Th17、IL-17、IL-6及RORγt表达水平均明显升高,TGF-β、IFN-γ表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,6-姜酚中、高剂量组及来氟米特组Th17、IL-17、IL-6及RORγt表达水平均明显降低,TGF-β、IFN-γ表达水平明显升高(P<0.01或P<0.05);6-姜酚低剂量组在上述指标表达水平上改善不明显,与模型组比较无差异(P>0.05)。
结论:
临床研究:姜酚胶丸联合来氟米特片与单纯应用来氟米特片对老年RA患者症状体征、炎性指标及DAS28评分均有良性调节作用,但两药联合效果更佳。
实验研究:6-姜酚可以有效降低CIA大鼠足趾关节肿胀率及AI评分,可能通过下调Th17、IL-17、IL-6及RORγt表达水平,上调TGF-β及IFN-γ表达水平来发挥其抑炎作用,从而起到缓解关节炎症反应作用。
评价姜酚胶丸治疗老年类风湿关节炎(RA)的临床疗效,并在此基础上构建胶原诱导性关节炎大鼠模型(CIA),探讨6-姜酚对Th17/IL-17通路的调控机制,进一步分析6-姜酚在RA治疗中的作用。
方法:
临床研究:将60例RA患者随机分为治疗组与对照组,治疗组予姜酚胶丸联合来氟米特片、对照组单纯予来氟米特片治疗,必要时酌情加用美洛昔康片,用药12周后通过治疗前后组内对比及治疗后组间对比,观察两组患者症状体征、炎性指标C反应蛋白(CRP)及血沉(ESR)、28个关节疾病活动度评分(DAS28)的变化情况。
实验研究:将90只Wistar大鼠随机分为6-姜酚高、中、低剂量组、来氟米特组、模型组及空白组,每组15只,除空白组外,其余各组分别建立CIA大鼠模型。造模第7天开始灌胃给药,空白组及模型组灌服等容积生理盐水,其余各组分别灌服高、中、低剂量6-姜酚及来氟米特,时间为28天。分别于给药前及给药后第7、14、21、28天计算大鼠关节肿胀率及关节炎指数(AI),并于给药后观察各组大鼠关节滑膜及软骨病理学改变。灌药第28天处死大鼠,取双后肢关节滑膜及软骨组织用于病理检测;取外周血用于流式细胞术(FCM)检测辅助性T细胞17(Th17)表达;分离血清用于酶联免疫吸附法(ELISA)检测转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)及γ-干扰素(IFN-γ)表达;取脾脏组织用于实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测IL-17、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)的基因表达以及蛋白质印迹法(WB)检测RORγt的蛋白表达。最后对结果进行统计分析。
结果:
临床研究:与治疗前比较,姜酚胶丸联合来氟米特片与单纯应用来氟米特片后老年RA患者症状体征、炎性指标、DAS28评分均有不同程度改善(P均<0.05);治疗后比较,两药联合效果更佳(P<0.05)。
实验研究:①与空白组比较,模型组大鼠足趾关节肿胀率及AI评分明显升高(P<0.05);与模型组比较,6-姜酚中、高剂量组及来氟米特组大鼠足趾关节肿胀率及AI评分明显降低(P<0.05);6-姜酚低剂量组治疗效果不明显,与模型组比较无差异(P>0.05)。②与空白组比较,模型组大鼠关节滑膜衬里细胞明显增厚,滑膜内可见大量炎细胞浸润,滑膜组织增生明显,滑膜血管增多,血管壁及周围炎细胞浸润明显,形成血管翳,软骨组织增生,骨小梁结构变薄,部分软骨钙化、坏死致骨质破坏;与模型组比较,6-姜酚中、高剂量组及来氟米特组大鼠关节滑膜衬里细胞明显变薄,滑膜内炎性细胞浸润及新生血管明显减少,滑膜增生明显改善,滑膜组织接近正常,软骨组织可见轻度增生、细胞排列稍紊乱,偶有软骨钙化及骨侵蚀,骨小梁结构无明显破坏。6-姜酚低剂量组关节滑膜及软骨病理改善程度与模型组相似。③与空白组比较,模型组大鼠Th17、IL-17、IL-6及RORγt表达水平均明显升高,TGF-β、IFN-γ表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,6-姜酚中、高剂量组及来氟米特组Th17、IL-17、IL-6及RORγt表达水平均明显降低,TGF-β、IFN-γ表达水平明显升高(P<0.01或P<0.05);6-姜酚低剂量组在上述指标表达水平上改善不明显,与模型组比较无差异(P>0.05)。
结论:
临床研究:姜酚胶丸联合来氟米特片与单纯应用来氟米特片对老年RA患者症状体征、炎性指标及DAS28评分均有良性调节作用,但两药联合效果更佳。
实验研究:6-姜酚可以有效降低CIA大鼠足趾关节肿胀率及AI评分,可能通过下调Th17、IL-17、IL-6及RORγt表达水平,上调TGF-β及IFN-γ表达水平来发挥其抑炎作用,从而起到缓解关节炎症反应作用。